1、背景與目的：
　　乳腺癌是一種女性常見的惡性腫瘤，發(fā)病率逐年增加且發(fā)病趨于低齡化，乳腺癌現(xiàn)已成為女性惡性腫瘤發(fā)病率最高的腫瘤。在我國(guó)，乳腺癌的發(fā)病以驚人的速度增長(zhǎng)，現(xiàn)已成為我國(guó)女性惡性腫瘤的首位。乳腺癌不僅給發(fā)病患者帶來了身體上巨大創(chuàng)傷，同時(shí)也給其所在的家庭造成非常大的經(jīng)濟(jì)壓力。因此，如何提高乳腺癌治療的臨床療效已成為醫(yī)學(xué)界關(guān)注的熱點(diǎn)問題。傳統(tǒng)治療主要采用化療、放療等手段，在一定程度上確實(shí)可以控制癌病的發(fā)展，但同時(shí)亦對(duì)正常細(xì)胞產(chǎn)生

2、殺傷作用，降低機(jī)體的免疫功能，更有甚者可導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥。中醫(yī)藥做為我國(guó)的國(guó)粹，在許多難治性疾病上發(fā)揮著其獨(dú)特的療效，在腫瘤的防治上有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。目前，越來越多的研究著眼于從中藥中研發(fā)新的治療藥物以及探討其治療機(jī)制。
　　白花丹素，傳統(tǒng)中藥白花丹的主要活性成分，是一種萘醌類化合物，化學(xué)式為C11H8O3，化學(xué)名為5-羥基-2-甲基-1,4-萘醌，主要藥理作用有抗炎、抗菌、抗氧化、抗癌等。國(guó)外研究證明白花丹素對(duì)多種腫瘤細(xì)胞，如前列

3、腺癌、肺癌、宮頸癌、肝癌、胰腺癌等均有顯著的治療作用，且未見明顯的毒副作用。白花丹素對(duì)乳腺癌的治療作用及相關(guān)機(jī)制卻鮮有報(bào)道，本研究旨在探討白花丹素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的的作用及其機(jī)理，為白花丹素用于乳腺癌的臨床治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用于人乳腺癌MCF-7細(xì)胞24h、48h和72h，MTT比色法分析白花丹素對(duì)MCF-7細(xì)胞增值抑制作用；Annexin

4、V-FITC染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL白花丹素作用MCF-7細(xì)胞24h后對(duì)細(xì)胞凋亡的影響；0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用MCF-7細(xì)胞24h后，PI單染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的分布，熒光定量PCR SYBR Green法檢測(cè)細(xì)胞周期調(diào)控因子CyclinD1、CyclinE、p21及p53轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)，Western blot檢測(cè)上述周期蛋白的表達(dá)；0.1μg/mL、

5、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用MCF-7細(xì)胞24h后，熒光定量PCR SYBR Green法檢測(cè)細(xì)胞凋亡因子Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bak轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)，Western blot檢測(cè)上述凋亡蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　通過本實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)：
　?。?）0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用于人乳腺癌MCF-7細(xì)胞24h、48h和72h，MTT比色法分析顯示，白花丹素可以直接

6、抑制人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖，并呈時(shí)間和劑量依賴性。
　?。?）0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用MCF-7細(xì)胞24h后，通過PI單染流式細(xì)胞儀分析，白花丹素誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞阻滯于G1期，成劑量依賴性。
　　（3）人乳腺癌MCF-7細(xì)胞經(jīng)過不同劑量的白花丹素處理24h后，各劑量的白花丹素組均出現(xiàn)不同程度的凋亡，且細(xì)胞的凋亡比例在早期呈現(xiàn)隨劑量增高而增長(zhǎng)的態(tài)勢(shì)，各劑量的白花丹素早期凋亡率

7、與正常對(duì)照組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　?。?）0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用MCF-7細(xì)胞24h，Real-time PCR顯示白花丹素在轉(zhuǎn)錄水平可以下調(diào)細(xì)胞周期因子CyclinD1和CyclinE的表達(dá)，上調(diào)p21和p53的表達(dá)，呈劑量依賴性，Western blot檢測(cè)顯示白花丹素可上調(diào)p21和p53蛋白的表達(dá)，下調(diào)CyclinD1和CyclinE蛋白的表達(dá)，呈劑量依賴性，提

8、示白花丹素可能通過ATM-p53-p21信號(hào)通路誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞G0/G1期周期阻滯。
　?。?）0.1μg/mL、1μg/mL、10μg/mL的白花丹素作用MCF-7細(xì)胞24h，Real-time PCR顯示白花丹素在轉(zhuǎn)錄水平可以下調(diào)細(xì)胞Bcl-2和Bcl-xl的表達(dá)，上調(diào)Bax和Bak的表達(dá)，呈劑量依賴性，Western blot檢測(cè)顯示白花丹素可上調(diào)Bax和Bak蛋白的表達(dá)，下調(diào)Bcl-2和Bcl-xl蛋白的表達(dá)，呈劑量依