1、云芝糖肽(PSP)是從云芝(Trametes versicolor)COV-1菌株深層發(fā)酵培養(yǎng)的菌絲體中提取的肽結(jié)合多糖，是國(guó)家Ⅱ類新藥，用于減輕癌癥病人化、放療產(chǎn)生的毒副作用、提高自身免疫力，并用于增強(qiáng)亞健康人群機(jī)體免疫力。但云芝糖肽對(duì)已存在過(guò)度免疫狀態(tài)機(jī)體的作用及機(jī)理尚不明確。本研究用LPS刺激的小鼠巨噬細(xì)胞Raw264.7作為炎癥模型，分析PSP對(duì)靜息和LPS過(guò)度刺激兩種不同狀態(tài)的巨噬細(xì)胞的調(diào)控作用。
　　 ELISA檢測(cè)

2、發(fā)現(xiàn)，PSP(25、100μg/ml)單獨(dú)作用于細(xì)胞時(shí)(24h)，有促進(jìn)IL-1β產(chǎn)生的趨勢(shì)，IL-1β濃度分別達(dá)到0.76±1.07pg/ml和2.73±1.29pg/ml(對(duì)照組為0.76±0.21pg/ml)，但均未達(dá)到顯著(p＞0.05)。LPS刺激可促使大量的IL-1β產(chǎn)生，濃度達(dá)到8.20±0.43pg/ml(p＜0.05)。PSP(25，100μg/ml)與LPS共同孵育時(shí)，IL-1β分泌下降到6.36±0.86和7.12

3、±3.21pg/ml，雖未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(p＞0.05)，但有減弱LPS刺激產(chǎn)生的高IL-1β水平的趨勢(shì)。用ELISA檢測(cè)25、100μg/ml PSP單獨(dú)作用細(xì)胞后PGE2的濃度，結(jié)果為114.11±17.67pg/ml和200.25±76.00pg/ml，略高于對(duì)照組(95.01±14.70pg/ml)。LPS刺激可促進(jìn)大量的PGE2產(chǎn)生(419.78±75.70pg/ml)(p＜0.05)，但當(dāng)與PSP(25、100μg/ml)

4、共同孵育時(shí)，PGE2的水平分別下調(diào)到146.97±15.20、154.96±58.73pg/ml，其中25μg/ml達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著(p＜0.05)。Western blot結(jié)果顯示，PSP(25、100μg/ml)不影響靜息狀態(tài)細(xì)胞COX-2(PGE2合成的關(guān)鍵限速酶)的表達(dá)水平，但能降低LPS刺激后的COX-2高表達(dá)，且有量效關(guān)系(p＜0.05)。
　　 免疫熒光觀察發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組細(xì)胞中核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB主要分布在細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞

5、核中少有分布；LPS刺激后，NF-κB大量轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中，很少在細(xì)胞質(zhì)中分布；PSP單獨(dú)作用于靜息狀態(tài)細(xì)胞可輕微促進(jìn)NF-κB的核轉(zhuǎn)移；當(dāng)與LPS共同作用時(shí)，則可弱化NF-κB大量向核內(nèi)轉(zhuǎn)移的程度。Western blot檢測(cè)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，NF-κB主要分布在靜息狀態(tài)細(xì)胞的細(xì)胞漿內(nèi)。LPS刺激可顯著降低胞漿內(nèi)的NF-κB水平，與免疫熒光觀察結(jié)果相符。PSP單獨(dú)作用時(shí)也可微弱地降低胞漿內(nèi)的NF-κB水平，但與LPS共同作用時(shí)，則可減少LPS

6、刺激所導(dǎo)致的胞漿NF-κB水平顯著下降，有阻滯NF-κB核轉(zhuǎn)移作用。流式細(xì)胞分析發(fā)現(xiàn)，PSP可干擾LPS-FITC與巨噬細(xì)胞結(jié)合，使細(xì)胞熒光強(qiáng)度從2.07±0.42(LPS-FITC組)減少到1.20±0.25(PSP+LPS-FITC組)。這些研究表明，PSP能激活正常靜息狀態(tài)的巨噬細(xì)胞，有弱的上調(diào)IL-1β和PGE2產(chǎn)生的能力。但當(dāng)細(xì)胞處在過(guò)度激活狀態(tài)時(shí)，PSP又能下調(diào)LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的大量IL-1β、PGE2等炎癥介質(zhì)，下調(diào)COX-