1、目的:研究積雪草酸(asiatic acid,AA)能否對(duì)抗谷氨酸(glutamate,Glu)誘導(dǎo)的興奮性神經(jīng)損傷,探討其可能的作用機(jī)制。構(gòu)建誘導(dǎo)新型帕金森病(Parkinson'sdisease,PD)模型的慢病毒載體,為研究AA的抗PD作用奠定基礎(chǔ)。
　　 方法:AA作用于Glu損傷的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y)上,MTT法檢測(cè)AA對(duì)抗Glu損傷的作用:Hoechst33342染色觀察細(xì)胞核變化；Annexin-V

2、／PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；分光光度計(jì)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)GSH含量和SOD活性；DCFH—DA染色檢測(cè)活性氧(ROS)生成；檢測(cè)AA對(duì)線粒體腫脹的影響以確定其與線粒體之間的相互作用；JC-1染色檢測(cè)線粒體膜電位；western blot檢測(cè)Bcl-2、Bax、PGC-1α和Sirtl蛋白表達(dá)量；用谷氨酸鈉(monosodium glutamate,MSG)誘導(dǎo)的小鼠認(rèn)知障礙模型來(lái)評(píng)價(jià)AA的在體抗興奮性毒性作用；in—fusion法構(gòu)建突觸核蛋白

3、(α-synuclein)核定位和胞漿定位慢病毒質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞。
　　 結(jié)果:細(xì)胞模型上,通過(guò)MTT檢測(cè),預(yù)先給予0.1-100 nM AA能對(duì)抗10 mM Glu所產(chǎn)生的損傷。首先AA抑制Glu誘導(dǎo)的細(xì)胞核皺縮和凋亡。其次,AA能夠清除Glu引起的細(xì)胞內(nèi)ROS的增加,提高GSH含量和SOD活性。并且提高線粒體膜電位、對(duì)抗線粒體腫脹。另外可以提高PGC-1α和Sirtl的表達(dá)同時(shí)對(duì)Bcl-2和Bax的表達(dá)影響不大。在體