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文檔簡介
1、目的：探討小分子干擾RNA(siRNA)對(duì)胃癌MGC803細(xì)胞E2F-1基因表達(dá)及其生物學(xué)行為的影響。 方法：用LipofectamineTM2000把E2F-1-siRNA(實(shí)驗(yàn)組)和negative control-siRNA(陰性對(duì)照組)轉(zhuǎn)染MGC803細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48h后，采用實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time quantitative PCR)及蛋白印跡(western blotting)技術(shù)分別檢測E2F-1 mRNA
2、及蛋白的表達(dá)，四唑鹽(MTT)法檢測MGC803細(xì)胞增殖的變化，流式細(xì)胞儀檢測MGC803細(xì)胞周期變化。應(yīng)用體外侵襲實(shí)驗(yàn)及克隆實(shí)驗(yàn)分別檢測E2F-1-siRNA對(duì)胃癌MGC803細(xì)胞侵襲力和增殖力的影響。 結(jié)果：E2F-1-siRNA和陰性對(duì)照siRNA由脂質(zhì)體介導(dǎo)成功轉(zhuǎn)染胃癌MGC803細(xì)胞，E2F-1-siRNA有效抑制了胃癌細(xì)胞E2F-1 mRNA的表達(dá)，與陰性對(duì)照組及未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞比較分別降低了84.8％和85.3％(P<
3、0.05)：E2F-1-siRNA抑制胃癌MGC803細(xì)胞E2F-1蛋白的表達(dá)，與陰性對(duì)照組及未轉(zhuǎn)染組細(xì)胞比較降低了77.2％和78.6％；E2F-1-siRNA抑制MGC803細(xì)胞的增殖，與陰性對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染組比較增殖分別抑制了69％和81.6％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；E2F-1-siRNA促使更多MGC803細(xì)胞DNA含量聚集于G2/M期附近，G2/M期DNA含量比例為(54.98±3.46)％，與陰性對(duì)照組(44.70
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