1、第一部分
　　目的:從系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中克隆神經(jīng)顆粒素(Neurogranin,Ng)基因,從而明確其與腦組織中Ng的表達(dá)形式是否存在差異。
　　方法:在NgmRNA編碼區(qū)兩端設(shè)計(jì)特異性引物,從SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后作為模板,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物測序。然后,將PCR產(chǎn)物構(gòu)建至PMD18-T載體中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞,以菌落PCR篩選陽性克隆并進(jìn)行序列測定。<

2、br>　　結(jié)果:獲得Ng基因3種可變剪接體,其中兩種可變剪接體尚未報(bào)道。
　　結(jié)論:兩種新的Ng剪接變異體存在于SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中,其功能有待進(jìn)一步研究。
　　第二部分:
　　目的:研究神經(jīng)顆粒素(Neurogranin,Ng)基因和其剪接變異體在SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)的表達(dá)水平,分析其與SLE疾病活動(dòng)度和下游效應(yīng)分子CaMKIV之間的關(guān)系,進(jìn)一步闡明Ng在SLE發(fā)病機(jī)制中的作用。
　

3、　方法:收集45例SLE患者,24例健康志愿者外周血標(biāo)本,采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(QRT-PCR)檢測外周血單個(gè)核細(xì)胞中Ng及其剪接變異體和CaMKIV的表達(dá),使用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:1.SLE患者Ng基因mRNA表達(dá)水平高于健康對(duì)照組,且活動(dòng)期患者外周血單核細(xì)胞Ng表達(dá)較穩(wěn)定期和正常對(duì)照組呈上調(diào)趨勢(shì),而Ng的表達(dá)水平在SLE病情穩(wěn)定組和正常對(duì)照組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);

4、>　　2.SLE患者Ng-IN基因mRNA表達(dá)水平與健康對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);
　　3.SLE患者Ng基因mRNA表達(dá)水平與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.666,P<0.01)
　　4.SLE患者Ng基因mRNA表達(dá)水平與CaMKIV呈正相關(guān)((r=0.460,P<0.01)。
　　結(jié)論:SLE患者NgmRNA表達(dá)上調(diào),且與SLE疾病活動(dòng)度呈正相關(guān),提示Ng基因異位表達(dá)可能與SLE的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。另外