1、目的：孕期飲酒導(dǎo)致的胎兒酒精綜合征（Fetal alcohol syndrome，F(xiàn)AS）是酒精對中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害中的嚴重后果，其中的損害包括了誘導(dǎo)神經(jīng)退行性變，促進神經(jīng)細胞的凋亡和變性壞死，以及影響神經(jīng)細胞的分化、遷移等病理性改變，但引發(fā)上述病理改變的作用機制尚不清楚。有研究表明酒精導(dǎo)致的病理性改變與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)之間存在因果關(guān)系，但缺乏詳細的報道。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細胞合成、加工蛋白質(zhì)及貯存Ca2+的主要細胞器。應(yīng)激激素、氧自由基和細胞因子等

2、都可以干擾內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能，導(dǎo)致未/錯誤折疊蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)堆積，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ERS）蛋白如葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose regulating protein78，GRP78）、磷酸化的翻譯起始因子2α（ phosphorylated eukaryotic translation initiation factory2α,p-eIF2α）及C/EBP同源蛋白（C/EBP homol

3、ogous protein，CHOP）表達的增加可激活 ERS。ERS雖是細胞防御適應(yīng)反應(yīng)的重要組成部分，但過度強烈或持續(xù)時間過長的 ERS可誘導(dǎo)凋亡、炎癥等病理性改變。目前的研究已經(jīng)表明 GRP78、p-eIF2α、CHOP是啟動內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路的重要調(diào)節(jié)蛋白。尤其是CHOP表達的增高使得ERS達到頂峰，可激活凋亡誘導(dǎo)因子的啟動而引發(fā)細胞凋亡。但內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白在孕期長時程酒精攝入后新生子鼠大腦中的表達變化及其與細胞凋亡之間的相關(guān)關(guān)系，目

4、前國內(nèi)外未見詳細報道。因此本研究在我室前期研究基礎(chǔ)上建立孕期飲酒大鼠模型，系統(tǒng)觀察了新生子鼠大腦皮層 GRP78、p-eIF2α、CHOP的表達變化及與細胞凋亡的相關(guān)關(guān)系，旨在探明酒精毒性作用引發(fā)的神經(jīng)細胞凋亡是否有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白的參與，為酒精導(dǎo)致的神經(jīng)損傷的防治提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：
　　1、本實驗采用健康Wistar雌性大鼠，體重260±10g。隨機分為正常對照組和孕期飲酒組。對照組在實驗期間一直使用蒸餾水飼養(yǎng)。飲酒

5、組開始給予10％濃度的酒精飼養(yǎng)，之后每日增加1％的酒精濃度，直至酒精濃度為20％。采用陰道涂片法(vaginal smear test)檢測雌性大鼠陰道脫落上皮細胞，以確定大鼠的發(fā)情周期。確定雌鼠處于發(fā)情期后，將其與性成熟期健康雄性大鼠以1:1比例于20:00至次日8:00合籠12 h。次日觀察雌鼠陰道栓的形成情況以確定是否懷孕。飲酒組在孕期使用濃度20％的酒精飼養(yǎng)，直到孕鼠分娩。為確保酒精濃度,每日8:00更換由市售56度北京紅星二鍋

6、頭白酒和蒸餾水新鮮配置的酒精溶液。隨機取飲酒組和對照組出生第3天（3d）、7天（7d）、11天（11d）的新生鼠大腦各5只經(jīng)固定、脫水、透明、包埋、切片等處理后待做各種染色使用。
　　1.1、蘇木精-伊紅（HE）染色觀察常規(guī)病理學(xué)改變。
　　1.2、免疫組織化學(xué)染色觀察相關(guān)蛋白表達變化。
　　1.3、原位末端標記法(TUNEL)檢測神經(jīng)細胞凋亡情況。
　　2統(tǒng)計學(xué)分析
　　數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標準差（Mean±S

7、D）”表示，用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，各組均數(shù)的比較行單因素方差分析（ANOVA），用最小顯著差法（least significant difference,LSD）作兩兩比較，以P＜0.05為有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1、常規(guī)組織病理學(xué)觀察（HE染色）
　　正常對照組生后3d、7d、11d新生大鼠大腦皮層神經(jīng)細胞排列整齊，未見水腫、缺失及其他病理學(xué)改變。飲酒組生后3d、7d、11d新生大鼠大

8、腦皮層神經(jīng)細胞排列不規(guī)則，局部細胞數(shù)目減少伴水腫，部分神經(jīng)細胞固縮。
　　2、 GRP78免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
　　正常對照組生后3d、7d、11d新生大鼠大腦皮層可見部分神經(jīng)細胞胞漿內(nèi)陽性表達，與對應(yīng)時間點正常對照組相比，飲酒組生后3d、7d、11d新生大鼠大腦皮層陽性細胞數(shù)目增多。
　　3、 p-eIF2α免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
　　正常對照組生后3d、7d、11d新生大鼠大腦皮層少數(shù)神經(jīng)細胞胞漿內(nèi)可見陽性表達

9、，對應(yīng)飲酒組生后3d、7d、11d新生大鼠大腦皮層神經(jīng)細胞胞漿內(nèi)陽性表達明顯增強，且陽性細胞數(shù)目明顯增多。
　　4、 CHOP免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
　　飲酒組生后3d、7d、11d新生大鼠大腦皮層神經(jīng)細胞胞漿內(nèi)陽性表達強度較同時間點對照組相比明顯增強，且陽性細胞數(shù)目明顯增多。
　　5、原位末端標記法(TUNEL)結(jié)果
　　正常對照組生后3d、7d、11d新生大鼠大腦皮層見少量散在凋亡細胞，飲酒組與對應(yīng)時間對照組相

10、比，新生大鼠大腦皮層的凋亡細胞數(shù)目明顯增多。
　　結(jié)論：
　　本研究成功建立了孕期飲酒的大鼠模型，通過常規(guī)組織病理學(xué)、免疫組織化學(xué)及原位末端標記法(TUNEL)觀察，得出以下結(jié)論：孕期飲酒導(dǎo)致了新生子鼠大腦皮層神經(jīng)細胞的排列紊亂、神經(jīng)細胞水腫及神經(jīng)細胞的固縮；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與了孕期飲酒導(dǎo)致的新生子鼠大腦皮層神經(jīng)細胞的病理性改變，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78、p-eIF2α和CHOP表達的增高可激活凋亡誘導(dǎo)因子的啟動而引發(fā)細胞凋亡。