1、隨著社會的發(fā)展，顱腦損傷的發(fā)生率、致死率和致殘率均逐年增加，顱腦損傷依然是威脅人類健康的主要疾患之一。近年來，顱腦創(chuàng)傷的救治成功率雖然有所提高，但顱腦創(chuàng)傷的機理研究仍有必要。小膠質(zhì)細胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布較廣，在神經(jīng)元的生理活動中起著支持、營養(yǎng)、保護及修復等重要功能，是神經(jīng)系統(tǒng)不可缺少的成分。對于小膠質(zhì)細胞在炎癥、癲癇、帕金森氏病、缺血等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的作用研究較多，但在腦外傷中的作用研究較少，外傷后腦內(nèi)小膠質(zhì)細胞是否對損傷刺激起反應

2、，反應性小膠質(zhì)細胞的分布有無區(qū)域特點，小膠質(zhì)細胞形態(tài)上有何改變以及時間過程，目前均未見到報道。因此，研究小膠質(zhì)細胞與神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷的關系，充分發(fā)揮其保護作用，盡可能降低其損害作用，有助于提高神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷的救治效果。白藜蘆醇是—類主要存在于葡萄、藜蘆、虎杖等植物中的多酚類化合物，具有抗血小板聚集、抗炎、清除自由基、抗癌、抗氧化、心血管保護等眾多作用，深入研究白藜蘆醇在神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療中的作用和機制具有重要的臨床意義。實驗通過改良Feeney

3、法獲得局灶性顱腦損傷動物模型，對不同組動物用白藜蘆醇干預，通過免疫組織化學染色法，觀察傷后OX-42陽性小膠質(zhì)細胞形態(tài)變化；用原位末端標記法觀察神經(jīng)細胞凋亡的規(guī)律及用放射免疫法檢測血清促炎性因子的變化趨勢，探討顱腦損傷的發(fā)病機制及白藜蘆醇的藥理作用，以期獲得高效、低毒、價廉的潛在性臨床藥物。 一、大鼠腦創(chuàng)傷后小膠質(zhì)細胞激活的時程及形態(tài)變化研究目的探討大鼠腦創(chuàng)傷后小膠質(zhì)細胞激活的時程及形態(tài)變化。方法采用改良的Feeney's自由落

4、體損傷模型，35只SD大鼠隨機分為對照組和創(chuàng)傷組，后者根據(jù)傷后處死時間點不同，再分為傷后1h，6h，12h，24h，48h和72h組，每組動物5只，在傷后不同時間點處死動物，取傷區(qū)腦組織行抗OX-42免疫組織化學染色。結果正常大鼠腦內(nèi)小膠質(zhì)細胞一般為靜息狀態(tài)，OX-42為陰性，在切片上不易發(fā)現(xiàn)或細胞形態(tài)不清晰；傷后1h，小膠質(zhì)細胞為靜息狀態(tài)，OX-42陰性，傷后6h小膠質(zhì)細胞為輕度反應，OX-42淺染，細胞形態(tài)隱約可見，不規(guī)則；傷后12

5、h，小膠質(zhì)細胞反應明顯，由靜息狀態(tài)變?yōu)樵缙诜磻獱顟B(tài)，OX-42深染，細胞形態(tài)清楚；傷后24h，小膠質(zhì)細胞反應達高峰，細胞形態(tài)更清楚，突起上可見到小棘；48h以后，反應減弱，OX-42淺染，細胞數(shù)量減少。結論大鼠腦創(chuàng)傷后小膠質(zhì)細胞被激活，細胞形態(tài)發(fā)生改變，海馬區(qū)亦有激活改變；反應的時程變化是傷后6h出現(xiàn)激活，12h反應明顯，24h達高峰，以后逐漸減弱。 本實驗揭示了局灶性腦創(chuàng)傷后小膠質(zhì)細胞在不同時間點激活情況和形態(tài)變化特征，為進一

6、步研究小膠質(zhì)細胞提供實驗資料。 二、白藜蘆醇對大鼠腦創(chuàng)傷后小膠質(zhì)細胞激活影響的實驗研究目的檢測白藜蘆醇治療前后大鼠傷區(qū)腦組織激活小膠質(zhì)細胞的形態(tài)及數(shù)量改變情況，以探討白藜蘆醇的腦保護作用。方法健康雄性SD大鼠75只，隨機分為創(chuàng)傷組、對照組、治療組，每組分傷后3h、12h、24h、48h、72h共5個時間點，各時間點每組動物5只，改良Feeney法自由落體致傷動物。治療組白藜蘆醇(50mg/kg體重)腹腔注射治療，對照組給予等量生

7、理鹽水治療，創(chuàng)傷組未給予藥物處理，分別于傷后各時間點麻醉動物，斷頭取傷區(qū)腦組織，抗OX-42免疫組化法檢測小膠質(zhì)細胞變化情況。結果傷后早期小膠質(zhì)細胞即被激活，不同時間點，小膠質(zhì)細胞形態(tài)不同。傷后各時間點治療組小膠質(zhì)細胞數(shù)量明顯減少(P＜0.05)，創(chuàng)傷組與對照組無明顯差異(P＞0.05)。結論傷后不同時間點激活小膠質(zhì)細胞的形態(tài)和數(shù)目不同，白藜蘆醇能抑制小膠質(zhì)細胞的激活，有腦保護作用。 三、白藜蘆醇對大鼠腦創(chuàng)傷后傷區(qū)腦組織神經(jīng)細胞

8、凋亡的影響目的探討白藜蘆醇對大鼠腦創(chuàng)傷后神經(jīng)細胞凋亡的影響及可能的作用機制。方法采用改良的Feeney自由落體腦損傷模型，對顱腦損傷大鼠用白藜蘆醇(50mg/kg體重)腹腔注射治療，傷前一天治療一次，傷后每天治療一次，直至處死動物，應用原位末端標記法(TUNEL)及免疫組織化學方法檢測受損腦組織治療前后TUNEL、Bcl-2及Bax的表達變化。結果治療組大鼠腦組織TUNEL及Bax表達陽性細胞數(shù)低于創(chuàng)傷組及對照組(P＜0.05)，Bcl

9、-2的表達傷后持續(xù)升高，治療組高于與對照組和創(chuàng)傷組(P＜0.05)，創(chuàng)傷組和對照組之間無明顯差異(P＞0.05)。結論白藜蘆醇具有抗凋亡作用，可能是通過抑制促凋亡因素，促進抑凋亡因素表達來減少顱腦損傷后神經(jīng)細胞的凋亡，發(fā)揮腦保護作用。 四、白藜蘆醇對大鼠腦創(chuàng)傷后炎性因子影響的實驗研究目的檢測白藜蘆醇治療前后大鼠血清促炎性因子TNF-α和IL-1β的濃度變化，以探討白藜蘆醇的腦保護作用。方法SD大鼠75只，隨機分為創(chuàng)傷組、對照組、

10、治療組，每組分傷后3h、12h、24h、48h、72h共5個時間點，各時間點每組動物5只，F(xiàn)eeney法自由落體致傷動物，治療組給予白藜蘆醇(50mg/kg體重)腹腔注射治療，傷前一天治療一次，傷后每天治療一次，直至采血時間點；對照組同法給予等量生理鹽水治療；創(chuàng)傷組不予治療，正常喂食水。分別于傷后各時間點股靜脈取血，靜置分層后離心，取血清低溫保存，放射免疫法檢測血清TNF-α和IL-1β濃度。結果傷后治療組TNF-α和IL-1β濃度比對

11、照組明顯降低(P＜0.05)，TNF-α和IL-1β在外傷組與對照組比較無明顯差異(P＞0.05)。結論白藜蘆醇可以減少傷后血清TNF-α和IL-1β濃度，對腦創(chuàng)傷有保護作用。 總結1、本實驗系統(tǒng)觀察了大鼠腦創(chuàng)傷后小膠質(zhì)細胞激活的時程及形態(tài)變化規(guī)律，主要表現(xiàn)在小膠質(zhì)細胞在傷后不同時間點形態(tài)變化不同，并證實應用白藜蘆醇可以抑制大鼠腦創(chuàng)傷后小膠質(zhì)細胞過度激活； 2、通過免疫組化方法及分子生物學方法證實應用白藜蘆醇可以抑制大鼠