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![農(nóng)桿菌介導(dǎo)柑橘指狀青霉遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化及其致病機理的初步研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/8/b4c1dc4e-3201-489d-abbd-d545270f3a8b/b4c1dc4e-3201-489d-abbd-d545270f3a8b1.gif)
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文檔簡介
1、指狀青霉是造成柑橘果實采后損失最嚴重的病原菌。因此,研究其致病機理,有效防治指狀青霉引起的病害是很有必要的。本實驗通過對農(nóng)桿菌介導(dǎo)指狀青霉轉(zhuǎn)化的體系進行優(yōu)化,穩(wěn)定高效地獲得大量突變轉(zhuǎn)化子,建立指狀青霉突變體庫。同時,對已獲得的轉(zhuǎn)化子進行比較分析,獲得了一株不使柑橘果實發(fā)病的突變菌株,對該菌株進行了分子分析(PCR分析、Tail-PCR分析、Southern blot等),找出T-DNA插入位點,通過RNAi技術(shù)探究突變位點的基因與指狀青
2、霉致病性的關(guān)系。主要的實驗結(jié)果如下:
1.優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的柑橘指狀青霉轉(zhuǎn)化條件:硝酸纖維素膜(NC膜)為承載膜,農(nóng)桿菌濃度OD600=0.6~0.8,指狀青霉孢子濃度為2×106CFU/ml,共培養(yǎng)時25℃恒溫培養(yǎng)48h。此時的轉(zhuǎn)化效率最高,能達到約20-50個轉(zhuǎn)化子/皿。建立了含有一千多個轉(zhuǎn)化子的指狀青霉突變體庫。
2.通過接種已獲得的轉(zhuǎn)化子于柑橘果實上,進行對比分析,獲得了一株不使柑橘發(fā)病的菌株,通過South
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