1、目的：篩選新的乳腺癌轉移相關基因并進行功能研究，為乳腺癌診斷提供分子標志，為乳腺癌治療提供靶點，為闡明乳腺癌發(fā)生和轉移機制提供線索。
　　 方法：利用mRNA差異顯示技術篩選乳腺原發(fā)癌與配對淋巴結轉移癌組織的差異表達基因片段；利用同位素標記的反向斑點雜交和熒光標記的基因芯片雜交方法驗證候選差異基因。采用實時定量逆轉錄-聚合酶鏈反應方法(qRT-PCR)檢測乳腺癌原發(fā)癌組織及癌旁正常組織中kinesin-like4(KNSL4)基

2、因mRNA表達，統(tǒng)計學分析與乳腺癌發(fā)生、臨床病理因素和患者預后的關系；采用免疫組織化學方法檢測乳腺癌組織中KNSL4基因編碼的驅動蛋白樣DNA結合蛋白Kid的表達，分析Kid的組織細胞定位及與細胞侵襲和轉移的關系?？寺NSL4 siRNA真核表達質粒載體pSilencerTM3.1-KNSL4 siRNA，轉染高表達Kid的人乳腺癌細胞系MDA-MB-435S，并建立穩(wěn)定沉默KNSL4表達的亞克隆細胞，以觀察KNSL4及其編碼蛋白Ki

3、d對細胞體內外生物學行為的影響。采用染色質免疫沉淀聯合啟動子芯片(ChIP-on-chip)方法篩選Kid下游調控基因，ChIP-qPCR方法驗證篩選基因與Kid的結合，qRT-PCR方法分析下調乳腺癌細胞Kid表達對候選基因的轉錄調節(jié)作用。
　　 結果：篩選得到4個未知的基因序列(Expressed Sequence Tag，EST)登錄在GenBank，序列號為BG518428、BG518429、BM005520、BM005

4、521；驗證證實KNSL4基因在乳腺轉移癌中表達下調。KNSL4 mRNA在癌組織中表達，而在正常組織中不表達(P=0.000)；KNSL4 mRNA低水平患者5年無病生存期低于高水平患者(P=0.016)，KNSL4 mRNA水平是臨床Ⅰ～Ⅱ期和Her2陽性乳腺癌患者預后預測分子標志物(P=0.023，P=0.041)。Kid蛋白在增殖的腫瘤細胞中高表達，而在侵襲和遷移的細胞中表達下調。KNSL4基因轉錄沉默的亞克隆細胞增殖能力降低，

5、細胞周期G2期比率增加，細胞有絲分裂阻滯，而細胞的克隆形成率沒有影響，體內和體外的侵襲和遷移能力也沒有改變。CDC25C和ATF7IP是Kid作為轉錄因子的下游調節(jié)基因，且Kid對二者起負調控作用。
　　 結論：KNSL4基因及其編碼蛋白Kid是乳腺癌細胞轉移狀態(tài)的指示者，而非轉移生物學過程的調控者。Kid在細胞有絲分裂中起關鍵作用，與CDC25C形成的負反饋調節(jié)環(huán)異常可以使細胞有絲分裂異常，進而使細胞惡性轉化和惡性增殖。KNS