基于qRT-PCR終點(diǎn)法的FMDV快速中和試驗(yàn)的建立.pdf_第1頁(yè)
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1、口蹄疫（FMD）是由微RNA病毒科口蹄疫病毒屬的口蹄疫病毒（FMDV）引起的一種急性、烈性傳染病。病毒中和試驗(yàn)(VNT)作為一項(xiàng)重要的檢測(cè)方法，在FMDV中和抗體檢測(cè)，疫苗毒株的選擇中起著非常重要的作用。為縮短VNT檢測(cè)時(shí)間，減少結(jié)果判斷時(shí)人為因素的影響，本論文將實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法應(yīng)用于VNT結(jié)果的判斷，建立了基于qRT-PCR終點(diǎn)法的FMDV快速中和試驗(yàn)（qRT-PCR-VNT）。首先建立基于FMDV3D基

2、因的Taqman探針qRT-PCR方法，其敏感性為53.4拷貝/μL，之后使用該方法，定量分析FMDV Asia-1/JSL/06毒株在IBRS-2細(xì)胞中的復(fù)制過(guò)程，建立FMDV Asia-1毒株在IBRS-2細(xì)胞中的復(fù)制曲線，確定感染后20 h為病毒復(fù)制的終點(diǎn)時(shí)間，即在該時(shí)間點(diǎn)，終止VNT，收集細(xì)胞，提取RNA，利用qRT-PCR方法定量檢測(cè)病毒RNA含量。根據(jù)病毒RNA拷貝數(shù)，判斷血清中和FMDV的能力，基于FMDV陰性血清，確定q

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