1、本研究分三部分。第一部分建立了白質(zhì)消融性白質(zhì)腦病的分子診斷方法。白質(zhì)消融性白質(zhì)腦病(1eukoencepha1opathy with vanishing white matter，VWM)由真核細(xì)胞翻譯啟動(dòng)因子2B(eukaryotic translation initiation factor2B，eIF2B)基因缺陷所致。eIF2B由eIF2Bα、eIF2Bβ、eIF2Bγ、eIF2Bδ、eIF2Bε5個(gè)亞單位組成，相應(yīng)編碼基因分別

2、為EIF2B1、EIF2B2、EIF2B3、EIF2B4、EIF2B5。本研究同時(shí)建立從外周血RNA途徑和DNA途徑檢測(cè)上述5個(gè)基因突變的方法，并應(yīng)用于一個(gè)臨床表現(xiàn)典型的VWM患者。結(jié)果顯示：RNA途徑僅在EIF2B5基因發(fā)現(xiàn)一呈雜合狀態(tài)的多態(tài)性位點(diǎn)c.2123A＞G(p.L587V)；DNA途徑在EIF2B2基因發(fā)現(xiàn)兩個(gè)堿基改變：intron3.c.515+43C＞A，c.1304G＞C，EIF2B3基因發(fā)現(xiàn)intron4.c.661

3、﹣35A＞G。
　　第二部分利用長(zhǎng)鏈RT-PCR結(jié)合T克隆-測(cè)序的方法，發(fā)現(xiàn)人EIF2B4基因的一個(gè)新型可變剪接產(chǎn)物。在一個(gè)具有典型臨床表現(xiàn)的VWM患者外周血EIF2B4基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)一部分產(chǎn)物外顯子7的5'端缺失26bp，為一個(gè)可變剪接3’位點(diǎn)新型可變剪接產(chǎn)物。針對(duì)新發(fā)現(xiàn)的剪接位點(diǎn)，本研究對(duì)其它物種的 EIF2B4基因進(jìn)行保守性分析，并對(duì)人EIF2B4基因可能的剪接變異體進(jìn)行預(yù)測(cè)。結(jié)果顯示：人EIF2B4基因外顯子7的5'端

4、長(zhǎng)26 bp與獼猴、黑猩猩、蘇門達(dá)臘猩猩、小鼠及大鼠之間具有相似的基因序列；生物信息學(xué)軟件均有預(yù)測(cè)到該可變剪接3’位點(diǎn)存在。同時(shí)，為檢測(cè)該可變剪接3’位點(diǎn)新型可變剪接產(chǎn)物，本研究對(duì)患者和正常人cDNA樣本進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增和PCR-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析。結(jié)果顯示：患者和正常人cDNA樣本均存在該新型可變剪接產(chǎn)物。
　　第三部分建立了1型神經(jīng)纖維瘤病的分子診斷方法，并分析其形成全身嵌合的1型神經(jīng)纖維瘤病的原因。1型神經(jīng)纖維瘤?。?/p>

5、neurofibromatosis type1，NF1）是最常見(jiàn)的常染色體顯性遺傳病。其致病基因?yàn)?NF1基因(NF1，NG_009018.1），定位于染色體17q11.2，由57個(gè)組成性外顯子和3個(gè)可變剪接外顯子組成。本研究通過(guò)提取一例散發(fā)1型神經(jīng)纖維瘤病病例的外周血RNA，PCR擴(kuò)增NF1基因編碼區(qū)序列并進(jìn)行序列測(cè)定；找到突變后，基因組DNA途徑證實(shí)突變。結(jié)果顯示：先證者檢測(cè)出無(wú)義突變c.7911C＞T(p.Q2510X)。為了對(duì)先

6、證者的NF1基因進(jìn)行嵌合突變分析，本研究針對(duì)已發(fā)現(xiàn)的突變，取先證者全血淋巴細(xì)胞、口腔上皮細(xì)胞和尿路上皮細(xì)胞基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其產(chǎn)物進(jìn)行T克隆及測(cè)序。結(jié)果表明：該突變?cè)谕庵苎馨图?xì)胞、口腔上皮細(xì)胞和尿路上皮細(xì)胞呈嵌合狀態(tài)，含該突變的克隆數(shù)分別占總數(shù)的42％、36%、12%。
　　本研究不僅在國(guó)內(nèi)較早建立了白質(zhì)消融性白質(zhì)腦病和1型神經(jīng)纖維瘤病的分子診斷方法，而且發(fā)現(xiàn)了人EIF2B4基因的一個(gè)新型可變剪接產(chǎn)物，探討了新生突變所