1、目的:研究Deguelin對于前列腺癌細胞株PC3和DU145是否具有抑制生長和誘導凋亡作用。驗證Deguelin是否對于TXT(泰素帝)及MIT(米托蒽醌)具有化療增敏作用。探討Deguelin在PC3和DU145細胞中可能的作用機制，希望為晚期前列腺癌患者提供一種新的治療選擇。 方法: CCK-8法進行細胞毒性試驗，繪制細胞生長抑制曲線。為了評價Deguelin與TXT及MIT的聯(lián)合作用效果，根據金氏公式計算q值，q

2、=E(AB)/[EA+(1-EA)×EB]。其中E(AB)為兩藥合用的抑制率，EA和EB為兩藥單用的抑制率。q>1.15表示兩藥有協(xié)同作用，q=0.85～1.15表示兩藥作用相加， q<0.85表示兩藥互相拮抗。通過流式細胞術PI染色檢測用藥前后細胞周期變化。采用流式細胞術Annexin v和PI雙染法檢測細胞凋亡。Western-blot檢測Akt、MAPK及其磷酸化蛋白表達，探討藥物作用機制。 結果: 1．細胞毒試驗

3、：10nmol/l-1μmol/l Deguelin對前列腺癌細胞株PC3的生長均有抑制作用，呈現明顯的時間、濃度依賴性。與陽性對照Wortmanin(渥曼青霉素)相比，同樣為100nmol/l的Deguelin對PC3細胞的抑制作用更為明顯(P<0.01)。不同濃度的Deguelin和Wortmanin對DU145細胞均未見明顯的生長抑制作用。在PC3細胞中聯(lián)合應用Deguelin和TXT及Deguelin和MIT較單藥對細胞生長的抑

4、制作用明顯增強(P<0.01)。Deguelin和TXT聯(lián)合應用時q值為1.173，兩藥有協(xié)同作用。Deguelin和MIT聯(lián)用時的q值為1.002，為疊加作用。在DU145細胞中Deguelin/TXT及Deguelin/MIT聯(lián)合應用與單藥時細胞存活率無明顯改變(P>0.05)，q值分別為0.936和0.907，說明其聯(lián)合應用時均表現為疊加作用。 2．細胞周期檢測：Deguelin作用48小時后，PC3細胞呈現出明顯的G2/

5、M期阻滯現象，并且隨著藥物濃度的提高，阻滯于G2/M期的細胞比例相應的上升。TXT10nmol/l作用48小時后，PC3細胞也呈現出明顯的G2/M期阻滯現象。Deguelin100nmol/l與TXT10nmol/l聯(lián)合作用48小時后則出現了明顯的S期阻滯現象。DU45細胞中Deguelin作用48小時后并未明顯改變細胞周期的分布。 3．細胞凋亡檢測：PC3細胞中，不同濃度的Deguelin作用72小時后均可引起凋亡，并且呈濃度

6、依賴性。與Wortmanin相比，同樣為100 nmol/l的Deguelin引起PC3細胞凋亡率要高于前者。PC3細胞中，TXT和MIT與Deguelin聯(lián)合用藥后的凋亡率明顯高于單獨用藥組(P<0.01)。在DU145細胞中，Wortmanin及Deguelin作用72小時后并未明顯改變細胞凋亡率，TXT單獨應用及與Deguelin聯(lián)合應用的凋亡率也無統(tǒng)計學差別。 4．Western blot檢測蛋白的表達：在PC3及DU1

7、45細胞中，總AKT蛋白、p42/44MAPK及其磷酸化蛋白在藥物作用前后的表達水平未見差別。PC3細胞中pAKT蛋白呈現持續(xù)高表達狀態(tài)，其表達在Wortmanin100nmol/l及Deguelin100nmol/l作用48小時后明顯降低，其中Deguelin組降低更加明顯。而DU145細胞用IGF-1刺激前幾乎未見pAKT蛋白的表達，在用IGF-1刺激15分鐘后出現較低水平的pAKT蛋白表達，此作用幾乎完全被Deguelin所阻斷。

8、 結論: Deguelin能夠抑制前列腺癌細胞株PC3增殖，呈現時間、濃度依賴性，對DU145細胞則無此作用。Deguelin使PC3細胞阻滯于G2/M期進而誘導其發(fā)生凋亡，對DU145細胞株則無此作用。在PC3細胞中，Deguelin對化療藥物TXT及MIT有化療增敏作用，聯(lián)合應用時明顯提高細胞生長抑制率和凋亡率，對DUl45細胞株則無此作用。Deguelin是通過抑制PI3K/AKT。而非MAPK通路實現抑制細胞增殖