1、目的
　　 生物鐘基因是設定并調控機體出現(xiàn)晝夜節(jié)律周期的系統(tǒng)，是一種以近似24小時為周期的振蕩器。Clock基因處于生物鐘基因家族的核心地位。結直腸癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，它的發(fā)生是多因素、多步驟的復雜生物學過程。許多研究表明，結直腸腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與生物鐘基因表達的異常存在關系，但其分子機制還知之甚少。
　　 本實驗采用分子生物學方法，研究hClock基因在人結直腸癌及正常腸道粘膜組織中的表達，hClock基因表

2、達與腫瘤相關基因以及與腫瘤轉移、病理分級、臨床分期的關系。通過研究，為結直腸腫瘤的發(fā)病機制提供新的理論依據(jù)，并為腫瘤治療提供新的靶點。
　　 樣本
　　 本實驗所用標本共30例，取自復旦大學生物醫(yī)學研究院病理研究中心腫瘤組織庫。標本采集于復旦大學附屬華山醫(yī)院普通外科自2007年1月至2008年9月行結直腸癌根治術患者的手術切除大體標本。標本采集于10:00～14:00時間段。在手術切除標本自體內切斷所有血供后15分鐘內，

3、自腫瘤侵犯處腸壁粘膜面取材作為實驗組，自遠離腫瘤近標本切緣處腸壁粘膜面取材作為對照組，所取標本立即投入液氮中妥善保存。并且完整收集所有患者的臨床病史資料進行分析。所有病例術前均未發(fā)現(xiàn)腫瘤遠處轉移，未行放療、化療。所有病例經石蠟病理證實為結直腸腺癌，切緣均未見腫瘤累及。
　　 方法
　　 1.蛋白免疫熒光染色組織化學方法檢測hCLOCK蛋白在癌組織與配對正常組織中表達的差異；
　　 2.熒光定量實時PCR方法檢測h

4、Clock基因及腫瘤相關基因(Bak、Bax、Bid、HIF-1α、ARNT、TNFRⅠ、TNFRⅡ及VEGF)在癌組織與配對正常組織中表達的差異。
　　 結果
　　 1.所有標本中均有hCLOCK蛋白的表達；hCLOCK蛋白在人結直腸癌中表達水平較正常組織明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；hCLOCK蛋白在腫瘤分化差、TNM分期晚期的腫瘤中表達升高水平更為明顯；64.3％有腫瘤淋巴結轉移的病例中hCLOCK

5、蛋白高表達；
　　 2.所有標本中均有hClock基因的表達；hClock基因在人結直腸癌中表達水平較正常組織明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)；hClock基因在人結直腸癌中的表達與hCLOCK蛋白的表達呈顯著線性正相關(P<0.01)；
　　 3.在人結直腸癌中，ARNT、HIF-1α、TNFRⅠ及VEGF基因表達水平明顯增高，TNFRⅡ表達水平明顯降低，差異均具有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)；Bak

6、基因表達水平增高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；Bax、Bid表達水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；ARNT、HIF-1α及VEGF在腫瘤分化差、TNM分期晚期的腫瘤中表達升高水平更為明顯；所有14例有腫瘤淋巴結轉移的病例中均有VEGF高表達；
　　 4.在人結直腸癌中，hClock基因表達水平與ARNT、HIF-1α及vEGF基因表達水平呈線性正相關，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與Bak、Bax、Bid、TN