1、冠狀動脈微栓塞(CME)是急性冠脈綜合征及冠狀動脈介入治療中十分常見且重要的臨床事件，積極防治CME具有重要的臨床意義。除了在急性期使用GPⅡb/Ⅲa受體拮抗劑及遠端血管保護裝置外，目前缺乏對CME后續(xù)及慢性期有效的干預策略。炎癥反應在CME發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，NF-кB是關鍵的前炎性轉錄因子。因此本研究嘗試利用大鼠自體血栓微粒造成心肌內(nèi)小冠脈栓塞，建立大鼠CME模型，旨在： (1)探討炎癥反應及核因子-кB(NF-кB)在CME后

2、心肌損害中的作用及機制； (2)評價NF-кB抑制劑干預對CME后心肌炎癥反應及心功能的影響。 一、大鼠冠狀動脈微栓塞模型的建立 目的：采用自體微血栓創(chuàng)建一種操作性強且貼近臨床的大鼠CME模型。 方法：采用清潔級健康雄性SD大鼠120只，體重280～320 g。隨機分為假手術組(n=24)、CME組(n=96)；CME組依所注射的血栓劑量分為3mg(CME3)、5mg(CME5)、7mg(CME7)組；并根據(jù)不同

3、觀察時間點再分為術后1、3、7、14天(d)4個亞組，每亞組8只。術前36小時尾靜脈取血1ml，于37℃溫箱內(nèi)形成血凝塊，勻漿器研碎血凝塊后用38μm篩孔過篩后備用。假手術組即左心室腔內(nèi)注射PBS 0.3ml；而微栓塞組注入微血栓制成的混懸液。采用ELISA法檢測術后1d血清肌鈣蛋白Ⅰ(cTnI)的水平。HE、HBFP及Masson染色觀察CME術后1d及14d心肌組織病理學改變；超聲心動圖、血液動力學檢測大鼠心功能變化。 結論

4、：經(jīng)左心室內(nèi)注射自體微血栓5mg、同時短暫主動脈夾閉可建立穩(wěn)定、重復性好且模擬人體病變的大鼠冠狀動脈微栓塞模型，適于進行冠狀動脈微栓塞病理生理機制的研究。 二、炎癥反應在冠狀動脈微栓塞后心肌損害中的作用及機制 目的：探討CME后炎癥反應及NF-кB激活在心肌損害中的作用及機制。 方法：清潔級雄性SD大鼠56只，體重280～320 g，分為假手術組(n=24)、微栓塞組(n=32，模型復制同第一部分)，分別于術后1

5、、3、7、14d處死。原位雜交組織化學染色檢測TNFα、IL-6、 ICAM-1 mRNA在心肌中的空間分布及動態(tài)變化，Real-Time PCR檢測其表達含量。以免疫組織化學染色、Western blot測定不同時間點心肌細胞TNFα、IL-6、 ICAM-1、IкBα的表達水平。應用免疫組織化學染色明確NF-кB P65核定位，電泳遷移率改變分析(EMSA)檢測心肌組織NF-кB DNA結合活性。Tunel法檢測心肌細胞凋亡，超聲多

6、普勒、血液動力學指標用于評定心功能。 結論： (1)CME心肌炎癥反應不僅局限于微梗灶及周圍，同時在許多非梗塞血管也出現(xiàn)炎癥細胞明顯激活，并波及到許多“無辜心肌”，產(chǎn)生“旁觀者效應”。 (2)CME后IкBα降解導致NF-кB激活，NF-кB激活促使炎性因子TNFα、IL-6、ICAM-1在基因及蛋白水平明顯上調(diào)，是誘導CME炎癥反應中的重要早期事件。 三、NF-кB抑制劑PDTC對大鼠冠狀動脈微栓塞后心肌炎癥及心功能的

7、影響 目的：探討特異性NF-кB抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)對大鼠CME后心肌炎癥反應的影響，進一步明確NF-кB激活在CME中的作用。 方法： SD大鼠152只，體重280-320g；24只為假手術組；余128只隨機分為1、CME組(生理鹽水腹腔注射1/日)；2、P200(PDTC 200 mg.kg<'-1>.day<'-1>)；3、P100組(PDTC 100 mg.kg<'-1>.day<'-1>)；4

8、、P50組(PDTC 50 mg.kg<'-1>.day<'-1>)。各處理組均為術前1小時通過腹腔注射給藥，持續(xù)至術后7d，分別于1、3、7、14d處死。以光鏡下微梗死面積、白細胞浸潤程度的測定及血清cTnI水平作為CME心肌損傷的指標；Masson染色檢測心肌細胞間質膠原纖維含量。應用電泳遷移率改變分析(EMSA)檢測心肌組織NF-кB的DNA結合活性，免疫組化、Western blotting測定不同治療組心肌細胞胞漿TNFα、I

9、L-6、 ICAM-1、IKBα的表達水平，Real-Time PCR檢測其心肌TNFα、IL-6、 ICAM-1 mRNA的動態(tài)表達，Tunel法檢測心肌細胞凋亡率，超聲多普勒、血液動力學指標評定心功能。 結論：CME后PDTC通過抑制NF-кB P65及其轉錄系統(tǒng)的激活，可顯著減少心肌組織炎癥介質過度產(chǎn)生及炎癥反應過度放大；PDTC抑制炎癥反應的效果呈現(xiàn)一定的劑量依賴性，增大劑量可能進入平臺期，甚至出現(xiàn)細胞凋亡增多等反作用；