1、摘要摘要N A C 轉錄因子家族在植物應答非生物脅迫及生長發(fā)育過程中具有重要作用。本研究以小黑楊為材料，利用R T - q P C R 從1 7 0 個楊樹N A C 轉錄因子家族基因中篩選出1 2 5 個應答鹽脅迫的基因。洲C 7 5 基因在鹽脅迫條件下表現為下調表達，該基因表達具有組織特異性，在次生木質部中表達水平明顯高于在其他組織中的表達水平?？寺 t r N A C l 5 基因的c D N A 片段，構建植物表達載體，培育轉

2、基因煙草。分析轉P t r N A C l 5 基因煙草生理指標。結果表明，轉P t r N A C l 5 基因煙草比對照的耐鹽能力明顯增強，表現為在鹽脅迫條件下轉基因煙草種子的萌發(fā)率、株高、鮮重、干重、根長均高于對照株系。同時，轉P t r N A C l 5 基因煙草木質素與纖維素相關基因表達水平明顯提高，其半纖維素、木質素及纖維素含量均明顯比對照株系高，間苯三酚染色顯示轉基因煙草次生壁變厚。構建P t r N A C l 5 基

3、因啟動子驅動G U S 基因植物表達載體，用農桿菌介導法侵染煙草幼苗。G U S 染色結果表明，該啟動子驅動的報告基因在根、莖、葉中均有表達，但在莖中的表達水平明顯高于其他組織。該結果與基因的組織特性分析結果一致。關鍵詞 小黑楊；N A C 轉錄因子家族；鹽脅迫；木質素目錄目錄摘要???????????????????????????????????????????????．．IA b s t r a c t ????????．?．?．

4、?．．???．????????????????????????????．．I I1 緒論???．???????．???????????????????????????????????．．11 ．1 楊樹的生物學特性????????????????????????????11 ．2 能源與環(huán)境問題?????????????????????????????11 ．3 木質素?????????????????????????????????1

5、1 ．3 ．1 木質素的組成?????????????????????????????．11 ．3 ．2 木質素的分布?????????????????????????????．21 ．3 ．3 木質素的用途?????????????????????????????．21 ．3 ．4 木質素的生物合成途徑?????????????????????????．31 ．3 ．5 木質素代謝途徑的調控??????????????????????

6、???．31 ．4N A C 轉錄因子家族????????????????????????????51 ．4 ．1N A C 家族的結構????????????????????????????51 ．4 ．2N A C 轉錄家族對木質素生物合成的調控??????????????????51 ．4 ．3N A C 轉錄因子鹽脅迫應答????????????????????????61 ．5 研究目的與意義?????????????????

7、????????????82 楊樹N A C 家族基因分析??????????????????????????92 ．1 實驗材料????????????????????????????????92 ．1 ．1 植物材料???????????????????????????????．92 ．1 ．2 主要試劑盒??????????????????????????????．92 ．2 楊樹應答鹽脅迫N A C 家族基因的篩選???????

8、????????????．92 ．2 ．1 R N A 提取及反轉錄???????????????????????????92 ．2 ．2R T - q P C R 引物設計???????????????????????????1 02 ．2 ．3 熒光定量P C R 分析??????????????????????????．1 02 ．2 ．4 高通量測序??????????????????????????????l 02 ．3 楊樹

9、N A C 家族基因表達模式分析?????????????????????1 O2 ．3 ．1 R N A 提取及反轉錄??????????????????????????一1 02 ．3 ．2 熒光定量引物設計???????????????????????????1 02 ．3 ．3 熒光定量P C R 分析??????????????????????????．1 22 ．4P t r N A C l 5 基因組織特異性分析?????