1、偽狂犬病病毒(Pseudorbies virus,PRV)屬皰疹病毒科、甲型皰疹病毒亞科中的豬皰疹病毒Ⅰ型，它能導致多種家畜和野生動物發(fā)生急性傳染病。豬是該病毒的貯存者和傳染源，豬感染PRV后常表現(xiàn)為神經系統(tǒng)的功能紊亂和呼吸系統(tǒng)疾病并引起嚴重的繁殖障礙。該病已給我國乃至全球的養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經濟損失，預防、控制并最終根除該病是我國當前面臨的一項艱巨任務。采用安全有效的疫苗進行免疫預防，是控制該病的主要措施。本試驗旨在構建含(GFP)報

2、告基因的偽狂犬病病毒gG基因缺失表達載體。 通過酶切、補平、連接的方法對PUSK載體質粒進行改造，消除了該載體上的BamHI和HindⅢ兩酶切位點。并將改造后的PUSK命名為PUSBH。根據(jù)pAcGFP1-C1基因序列設計一對引物，分別在引物的上、下游5’端引入了NotI酶切位點，通過PCR擴增將目的基因.AcGFP(包括GFP、CMV、MCS、SV40 Poly(A))克隆入pGEM-T-Easy載體內，構建了重組質粒。經酶切

3、和PCR鑒定證明插入片段是AcGFP基因，并將重組質粒命名為pT-GFP。用NotI酶切重組質粒pT-GFP和載體PUSBH并回收，將載體去磷酸化后與目的片段AcGFP鏈接，通過PCR擴增、酶切、序列測定證明，該轉移載體構建成功。并將其命名為PUSG。該轉移載體含有四個單一酶切位點可供外源基因的插入，從而為構建以偽狂犬病毒作載體的二價或多價基因工程疫苗打下了基礎。 利用脂質體介導的方法，將轉移載體質粒PUSG與PRV基因組DNA