含單一loxP位點(diǎn)重組偽狂犬病毒的構(gòu)建.pdf_第1頁(yè)
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1、偽狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)是雙股線狀DNA病毒,其基因缺失苗不僅能有效預(yù)防偽狂犬病,而且可作為構(gòu)建其他活載體疫苗的常載體。目前重組PRV的構(gòu)建普遍采用同源重組或細(xì)菌人工染色體克隆技術(shù),操作過(guò)程繁瑣,技術(shù)難度較大,耗時(shí)較長(zhǎng)。部位特異重組是由識(shí)別特定DNA序列的重組酶介導(dǎo)的遺傳重組,其操作相對(duì)簡(jiǎn)單,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于微生物和動(dòng)植物基因組的改造,其中應(yīng)用最為廣泛的是來(lái)源于P1噬菌體的Cre/loxP系統(tǒng)。
　

2、　 為了簡(jiǎn)化重組PRV的構(gòu)建步驟,本研究根據(jù)PRV UL區(qū)序列設(shè)計(jì)兩對(duì)引物,以PRV Bartha K61疫苗株基因組為模板,用PCR擴(kuò)增的TX基因片段為同源臂,構(gòu)建出同源重組載體pMD-TK。同時(shí)以真核表達(dá)載體pEGFP-N1為模板,將兩側(cè)含loxP位點(diǎn)的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)基因插入pMD-TK,構(gòu)建同源重組轉(zhuǎn)移載體pMD-TK-EGFP/loxP。用純化的PRV基因組DNA與同源重組轉(zhuǎn)移載體pMD-TK-EGFP/lox

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