1、1．兔BMSCs細胞成骨方向誘導培養(yǎng)及鑒定
　　 目的: 探究骨髓間充質干細胞向成骨細胞誘導分化過程中基因表達模式。方法: 抽取兔股骨遠端骨髓，全骨髓貼壁法培養(yǎng)獲得骨髓間充質干細胞，用條件培養(yǎng)基進行誘導，用RT-PCR的方法檢測ALP、OPN、collagen-Ⅰ、bFGF和OC基因的表達，并對BMSCs表面抗原CD44及ALP活性進行鑒定。結果: 誘導培養(yǎng)后，OPN、、ALP、collagen-Ⅰ、OC、bFGF基因分別于第1

2、、2代細胞正常表達，BMSCs誘導培養(yǎng)第一代檢測抗原CD44陽性率達44.4%，ALP含量增高無統(tǒng)計學意義。結論: 兔骨髓間充質干細胞在體外誘導培養(yǎng)中自原代到第2代逐漸向成骨細胞分化，成骨細胞特異性基因順序表達，已具備成骨細胞特征，此為進一步探討骨髓間充質干細胞向成骨細胞分化基因表達機制提供了實驗依據(jù)。
　　 2．bFGF-慢病毒真核表達載體構建及轉染
　　 目的: 構建攜帶人bFGF基因的慢病毒載體，構建攜帶GFP基因

3、的慢病毒載體作為對照,分別轉染成骨方向誘導的BMSCs，鑒定bFGF和GFP基因的表達。方法: 設計人bFGF基因引物，用Trizol法提取胎盤組織RNA，用RT-PCR的方法擴增出bFGF基因，連接至pLenti6/V5-D-TOPO? 表達質粒，經Xho-Ⅰ、BamH-Ⅰ雙酶切和DNA測序證實質粒正確構建。在脂質體轉染劑Lipofectamine 2000的介導下，bFGF-pLenti6/V5-D-TOPO表達質粒同包裝質粒pLP

4、1、pLP2、 包膜質粒pLP/VSVG 共轉染293FT細胞株，收集bFGF-慢病毒上清轉染誘導后第2代的兔BMSCs。設計GFP基因引物，以GFP-PMSLV-Plazmid為模板，PCR的方法擴增出GFP基因，連接至pLenti6/V5-D-TOPO? 表達質粒，GFP-慢病毒載體的構建及轉染BMSCs過程同bFGF-慢病毒。RT-PCR方法檢測bFGF mRNA水平的表達。結果: 轉染48小時后，對照組BMSCs可見綠色熒光蛋白