1、E郁磊：ETECK88ab／K88ad菌毛操縱子fae全基I天lLT提升細菌黏附性能的初步研究lIIIIIIIIIIIlllIIIlUIY20498421ETECK88ab／K88ad菌毛操縱子fae全基因的克隆、表達及LT提升細菌黏附性z月‘匕l(fā)c的初步研究專業(yè)：微生物學研究生：郁磊導師：朱國強教授中文摘要產腸毒素大腸桿菌(EnterotoxigenicEscherichiacoliETEC)是導致斷奶前仔豬腹瀉和死亡的主要病原之一。

2、該病原菌含有兩種致病因子：菌毛粘附素和腸毒素。菌毛粘附素與上皮細胞微絨毛的相互作用使ETEC能定殖于仔豬小腸。首次從腹瀉仔豬分離鑒定的ETEC菌毛粘附素為K88菌毛。大多數從腹瀉仔豬分離到的ETEC菌株表達有K88、K99、987P或F41菌毛粘附素；其中，K88是最流行的菌毛祜附素。近期的研究認為，細菌表達熱敏腸毒素LT的功能除了導致宿主腹瀉外，對小腸上皮細胞的細菌黏附具有促進作用。因此，本研究將集中如下兩部分：一、克隆、表達ETEC

3、K88ab／K88ad菌毛基因，并比較K88菌毛三種血清型的野生菌和重組菌對豬小腸上皮細胞的黏附差異；二、克隆、表達LT毒素基因，并探索LT毒素的表達對小腸上皮細胞的細菌黏附性能的影響。上述研究旨在為深入全面地研究ETEC的毒力因子奠定基礎。試驗分如下兩部分：研究一：利用PCR技術，以產腸毒素大腸桿菌(ETEC)K88ab標準株C83901和K88ad標準株C83903基因組DNA為模板擴增出編碼K88菌毛操縱子fae基因，大小約79K

4、b。將其克隆入表達質粒載體pBR322，經限制性內切酶消化、瓊脂糖電泳鑒定，構建和篩選出含J下確插入fae操縱子基因的pBRK88ab和pBRK88ad重組質粒。進一步將上述重組質粒DNA轉化入不含任何菌毛的大腸桿菌SE5000株。該重組菌可分別和鼠抗重組k88菌毛多抗血清和鼠抗K88菌毛單克隆抗體產生凝集反應，在電鏡下觀察到重組菌表面大量表達K88菌毛。用熱抽提法提取其體外表達的K88ab和K88ad菌毛，經SDSPAGE電泳和考馬斯