1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文CTB基因和CTBureB融合基因水稻表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化姓名：姜云水申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：方平楚20040501和3，引物723C退火延伸獲得產(chǎn)物QK片段，然后通過PCR法融合兩個片段，獲得WxoK融合片段。(3CTB—ureB鼗臺基因瓣隸疆表達(dá)載體pCWUN：PCR合成NOS終止予，扶震撼pUCU主切下CTBureB融合基幽，然后依次將NOS終止予、CTBureB融合基因和Wx—oK融臺片

2、段捅入質(zhì)粒pCA2耀3IAl300，舞選、鍪定耋綴囊黢pcwuN。3水稻表達(dá)載體pl3W4一CTB和pcWUN分別轉(zhuǎn)化感受態(tài)根瘸土壤桿蔚，經(jīng)過PCR篩選和酶切鑒定，獲褥撮癌壤轷螢轉(zhuǎn)德予。4水稻幼胚誘導(dǎo)胚性愈傷組織，然后根瘤土壤桿菌舟導(dǎo)表達(dá)裁體p13W4CTB轉(zhuǎn)化水稻胚性愈傷縫綴，經(jīng)過抗性篩選、分純粒生根培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植橡，PCR鑒定轉(zhuǎn)基因搬株?？p果1PCR分析、酶切鑒定及其DNA序列分析證實CTB基因已經(jīng)以正確方向插入到載體p13W4中

3、，褥顯所競隆的基因與報道熬矧應(yīng)接替酸棗鰳?biāo)脼R牲為t00％；NOS終盤子、CTBureB融臺基因粒Wx—QK融合片段電蚍芷確方向、相應(yīng)的次序插入剎載體pCAMBIAl300中，CIB—ureB融合基因讀碼框蓬確，將其與GenBank串公露熬褶筑筵魏序列魄鞍，CTB基禹癢翊豹目源贛為100％，摧定氨蒸馥痔列同源性也為100％。ureB輳因序列同源性為96O％～977％，氨熬酸的同源性為988％一995％。王PCR分柝、懿秘鑒定誕實隸稻裘運載