1、B型單端孢霉烯族毒素是由鐮刀菌產生的一組單端孢霉烯族真菌毒素，廣泛污染小麥、大麥、玉米等谷物及其產品。這類毒素具有多種毒性作用，能夠導致拒食、嘔吐、惡心、生長遲滯、神經內分泌紊亂和免疫抑制等，嚴重威脅動物和人類健康。特別是拒食和嘔吐，涉及嚴重的食源性中毒問題。然而，B型單端孢霉烯族毒素誘導拒食和嘔吐反應的劑量和機理尚不清楚。B型單端孢霉烯族毒素包括5種毒素:(1)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON);(2)3-乙酰

2、基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(3-acetyldeoxynivalenol，3-ADON);(3)15-乙?；撗跹└牭毒┐?15-acetyldeoxynivalenol，15-ADON);(4)鐮刀菌酮-X(Fusarenon X，FX);(5)雪腐鐮刀菌烯醇(Nivalenol，NIV)。本研究以這5種毒素為研究對象，建立了小鼠急性拒食模型;以DON為代表毒素，從迷走神經和促炎性細胞因子等方面著手，探索了DON誘導拒食反應的機理;比較

3、研究了B型單端孢霉烯族毒素誘導拒食反應的量效關系和持續(xù)時間，制定了B型單端孢霉烯族毒素誘導拒食反應的最大無作用劑量(No observedadverse effect，NOAEL)和最小有作用劑量(Lowest observed adverse effect，LOAEL);建立了水貂急性嘔吐模型，比較研究了B型單端孢霉烯族毒素誘導嘔吐反應的量效關系，嘔吐發(fā)生率，潛伏期和持續(xù)時間，制定了B型單端孢霉烯族毒素誘導嘔吐反應的NOAEL和LOA

4、EL，以及半數致嘔吐量(50％ emetic dose，ED50);并以DON為代表毒素，從神經遞質5-羥色胺(Serotonin，5-HT)，神經肽肽YY(Peptide YY，PYY)和膽囊收縮素(Cholecystokinin，CCK)的調控作用著手，探索了DON誘導嘔吐反應的機理。
　　 試驗Ⅰ：小鼠急性拒食模型的建立及DON誘導小鼠拒食反應的機理研究
　　 應用B6C3F1雌性小鼠建立了一種急性拒食模型，分別通

5、過腹腔注射和灌胃攻毒DON(劑量范圍0-5 mg·kg-1)，然后測定小鼠攻毒后16h內的采食量，研究了DON誘導拒食反應的量效關系，持續(xù)時間和耐受性。應用迷走神經切斷術，研究了迷走神經在DON誘導的拒食反應中所起的作用。采用DON誘導拒食反應的NOAEL(2.5mg·kg-1)對小鼠進行灌胃攻毒，對照組灌胃PBS，并在攻毒0，2和6h后取小鼠脾臟，應用實時熒光定量PCR(Real-time PCR)技術檢測DON對細胞因子白細胞介素I

6、L-1β和IL-6的mRNA基因表達的影響。結果表明:DON能夠誘導急性拒食反應，腹腔注射或灌胃攻毒后2h就會發(fā)生明顯的拒食反應，并且具有劑量依賴性。腹腔注射攻毒時，DON誘導拒食反應的NOAEL和LOAEL分別為0.5和1 mg·kg-1，而灌胃攻毒時分別為1和2.5 mg·kg-1。DON誘導的拒食反應是短暫的，當給予1 mg·kg-1DON時，拒食反應持續(xù)3 h;而給予5 mg·kg-1DON時，拒食反應持續(xù)6h。攻毒后2-16

7、h，DON又能夠誘導促進食欲反應，并且也呈劑量依賴性。48 h重復進行DON攻毒會對其誘導的拒食反應產生輕微的耐受作用。但是7d重復進行DON攻毒卻不會產生耐受，說明這種輕微的耐受作用是可逆轉的。而切斷迷走神經對DON誘導的拒食反應無顯著影響，說明DON誘導的拒食反應不涉及迷走神經通路。DON能夠上調脾臟中IL-1β和IL-6 mRNA表達，灌胃攻毒后2h，IL-1β和IL-6的表達達到峰值;而攻毒6h后，IL-1β和IL-6 mRNA

8、的表達回到基礎水平，說明DON誘導的急性拒食反應與脾臟中IL-11β和IL-6 mRNA的表達呈正相關。
　　 試驗Ⅱ：B型單端孢霉烯族毒素誘導小鼠拒食反應的比較研究
　　 應用上一章建立的小鼠急性拒食模型，分別通過腹腔注射和灌胃攻毒(劑量范圍0-5 mg·kg-1)，然后測定小鼠攻毒后16h內的采食量，研究了B型單端孢霉烯族毒素中的3-ADON、15-ADON、FX和NIV誘導的拒食反應，并與DON誘導的拒食反應進行了

9、比較。結果表明:與DON相似，腹腔注射和灌胃攻毒3-ADON和15-ADON誘導的拒食反應是急性的，短暫的，攻毒后2h就會發(fā)生明顯的拒食反應，并且具有劑量依賴性，但是僅僅持續(xù)數小時，攻毒后16h，食欲恢復正常。腹腔注射攻毒時，3-ADON和15-ADON誘導拒食反應的NOAEL和LOAEL分別為0.5和1 mg·kg1，而灌胃攻毒時分別為1和2.5 mg·kg-1。與之不同的是，腹腔注射或灌胃攻毒FX和NIV能夠誘導急性的，持續(xù)性的拒食

10、反應，反應能夠持續(xù)48-96 h。FX腹腔注射和灌胃攻毒的NOAEL都是0.025 mg·kg-1，而LOAEL都是0.25 mg·kg-1bw。而NIV在腹腔注射攻毒時的NOAEL和LOAEL分別為0.01和0.1 mg·kg-1，灌胃攻毒時分別為0.1和1 mg·kg-1。以上結果說明，腹腔注射攻毒B型單端孢霉烯族毒素誘導的拒食反應強于灌胃。根據NOAEL和LOAEL，B型單端孢霉烯族毒素誘導拒食反應的毒性順序為:NIV＞FX＞DO

11、N≈3-ADON≈15-ADON(腹腔注射);FX＞NIV＞DON≈3-ADON≈15-ADON(灌胃)。
　　 試驗Ⅲ：水貂急性嘔吐模型的建立及B型單端孢霉烯族毒素誘導水貂嘔吐反應的比較研究
　　 建立了一種水貂急性嘔吐模型，分別通過腹腔注射和灌胃攻毒(劑量范圍0-1mg·kg-1)，監(jiān)測了B型單端孢霉烯族毒素DON、15-ADON、3-ADON、FX和NIV誘導嘔吐反應的潛伏期、持續(xù)時間、發(fā)生率和反應強度，比較了5種

12、毒素誘導嘔吐反應的能力。并應用SAS等統(tǒng)計學方法分析得到了B型單端孢霉烯族毒素誘導嘔吐反應的NOAEL、LOAEL和ED50。結果表明:B型單端孢霉烯族毒素能夠誘導急性短暫的嘔吐反應，攻毒后幾十分鐘就會發(fā)生反應，持續(xù)數小時，并具有劑量依賴性。隨著劑量的增加，嘔吐反應的潛伏期會縮短，持續(xù)時間會延長，發(fā)生率和反應強度會增高。腹腔注射攻毒，DON，FX和NIV的NOAEL和LOAEL分別為0.05和0.1mg·kg-1，而15-ADON和3-

13、ADON的NOAEL都是0.1 mg·kg-1，LOAEL分別為0.25和0.2 mg·kg-1。灌胃攻毒，DON和FX的NOAEL和LOAEL分別是0.01和0.05mg·kg-1，15-ADON的NOAEL和LOAEL分別是0.01和0.1 mg·kg-1，3-ADON的NOAEL和LOAEL分別是0.05和0.25 mg·kg-1，NIV的NOAEL和LOAEL分別是0.1和0.25 mg·kg-1。腹腔注射攻毒，DON、15-A

14、DON、3-ADON、FX和NIV的ED50分別為80，170，180，70，and60μg·kg-1;而灌胃攻毒DON、15-ADON、3-ADON、FX和NIV的ED50分別為30，40，290，30 and250μg·kg-1。參照NOAEL、LOAEL和ED50，B型單端孢霉烯族毒素誘導嘔吐反應的毒性順序為:NIV≈FX≈DON＞15-ADON≈3-ADON(腹腔注射);DON≈FX≈15-ADON＞NIV＞3-ADON(灌胃)

15、。
　　 試驗Ⅳ：DON誘導水貂嘔吐反應的機理研究
　　 應用上一章建立的水貂急性嘔吐模型，研究5-HT3受體拮抗劑格拉司瓊(Granisetron，GRA)、Y2受體拮抗劑JNJ-31020028和CCK1受體拮抗劑地伐西匹(Devezepide，DEV)對DON誘導嘔吐反應的阻斷作用，探索DON誘導嘔吐反應的通路。然后，分別采用DON誘導嘔吐反應的LOAEL和100％致嘔吐劑量0.1和0.25mg·kg-1對水貂進行

16、腹腔注射攻毒，對照組腹腔注射PBS，分別在攻毒后15，30，60和120 min采血，應用直接競爭ELISA法測定外周血中DON的含量、神經遞質5-HT、神經肽PYY和CCK的表達;同時監(jiān)測水貂在0-120 min內的嘔吐反應。結果表明:在嘔吐拮抗劑試驗中，CCK1受體拮抗劑DEV對DON誘導的嘔吐反應無明顯阻斷作用;Y2受體拮抗劑JNJ-31020028能夠顯著減弱DON誘導的嘔吐反應;而5-HT3受體拮抗劑GRA既能夠徹底阻斷DON

17、誘導的嘔吐反應，也能夠部分阻斷PYY誘導的嘔吐反應。外周血中DON的濃度在15-30 min達到峰值，然后迅速下降，在120 min時回到基礎水平;DON能夠上調外周血中5-HT和PYY的表達，并且具有劑量依賴性。DON腹腔注射攻毒后60 min，外周血中5-HT和PYY的濃度達到峰值，而攻毒后120 min，外周血中5-HT和PYY的濃度回到基礎水平。外周血中PYY的濃度在30 min時開始升高，而5-HT在30 min時沒有明顯變化