1、雞的卵巢卵泡生長發(fā)育過程中，下丘腦-垂體-性腺軸（hypothalamic-pituitary-gonadal axis,HPGA）起到了非常重要的作用。下丘腦-垂體-性腺軸是一個完整而協(xié)調(diào)的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，下丘腦通過分泌GnRH調(diào)節(jié)垂體LH和FSH的釋放，從而控制性腺發(fā)育和性激素的分泌。本研究對GnRH1在雞下丘腦和卵巢卵泡發(fā)育過程中的表達及其調(diào)控作用進行了初步分析。結(jié)果如下：
　　1．qRT-PCR分析GnRH1基因在30、6

2、0、90、110和140日齡產(chǎn)蛋（140a）和未產(chǎn)蛋（140b）濟寧百日雞下丘腦和卵巢中的表達。結(jié)果顯示：GnRH1 mRNA在下丘腦和卵巢中的表達從30日齡至140日齡未開產(chǎn)雞均呈現(xiàn)出低高低高的趨勢，60日齡與140日齡的表達量顯著高于其他各個時期（P＜0.05），但兩者之間差異不顯著（P＞0.05）；而在卵巢中，140日齡時GnRH1 mRNA相對表達量同下丘腦一樣顯著上調(diào)，但產(chǎn)蛋時卻顯著下調(diào)（P＜0.05），表現(xiàn)出與下丘腦不同的變

3、化趨勢。在開產(chǎn)后雞的不同等級卵泡中，GnRH1 mRNA表達從SW（the small white follicle）到F5（the fifth large follicle）最后到F1（the first large follicle）和POF1（the first post-ovulatory follicle）中的表達差異未達到顯著（P＞0.05）。
　　2．免疫組化檢測結(jié)果顯示，GnRH1免疫陽性信號在未開產(chǎn)雞（45d）和

4、開產(chǎn)雞（159d）卵巢膜細胞和顆粒細胞均被檢測到，并且在未性成熟雞的卵巢中，其主要在卵泡顆粒細胞層表達較高，而性成熟后則在膜細胞層表達較高。進一步分離性成熟卵巢卵泡的顆粒細胞和膜細胞，qRT-PCR結(jié)果表明，GnRH1 mRNA在卵泡膜細胞中的表達顯著高于顆粒細胞（P＜0.05），與免疫組化結(jié)果一致。
　　3.構(gòu)建GnRH1基因的過表達載體，轉(zhuǎn)染雞原代膜細胞和顆粒細胞后，檢測LHR，F(xiàn)SHR，PGR，ERα基因的表達量。結(jié)果顯示，

5、過表達GnRH1后，在顆粒細胞中，四個受體基因表達量均未出現(xiàn)顯著變化；在膜細胞中，F(xiàn)SHR，PGR，ERαmRNA表達量未發(fā)生顯著變化，而LHR mRNA表達量出現(xiàn)了顯著下調(diào)（P＜0.01）。隨后用LH和FSH激素處理膜細胞，檢測GnRH1 mRNA的表達變化。結(jié)果顯示，F(xiàn)SH激素對GnRH1的表達無顯著影響，LH在濃度50 ng/mL時，GnRH1表達量顯著上調(diào)（P＜0.05）；繼續(xù)加大LH的濃度發(fā)現(xiàn)，當LH濃度大于200 ng/mL

6、時，GnRH1 mRNA表達量開始下調(diào)，而LHR mRNA表達量與LH濃度呈正相關(guān)。隨后用50 ng/mL LH激素與GnRH1過表達共處理后，LHR表達量出現(xiàn)顯著下調(diào)（P＜0.01）。
　　4.在雞等級卵泡膜細胞中過表達GnRH1基因并進行轉(zhuǎn)錄組測序，以未過表達GnRH1基因的膜細胞為對照，在過表達GnRH1的等級卵泡膜細胞中共篩選出了3997個差異表達基因，其中上調(diào)的差異表達基因1998個，下調(diào)的差異表達基因1999個，并對部

7、分差異表達基因進行了qRT-PCR驗證，包括表達量下調(diào)的基因CYP11A1，MMP11，MMP13， StAR，上調(diào)的基因FOXP1，F(xiàn)OXP2，VEGFA，USF1。對差異基因進行功能注釋發(fā)現(xiàn)，它們被富集到FOXO、MAPK、TGF-beta、VEGF、GnRH、PPAR、Prosgesterone-mediated oocyte maturation、Toll-like receptor以及Wnt等信號通路。
　　5.分析了G

8、nRH1基因5′調(diào)控區(qū)長度3863bp片段的啟動活性，雙熒光素酶活性分析結(jié)果表明，在GnRH1基因啟動子區(qū)3863bp長度內(nèi)各個區(qū)域均未發(fā)現(xiàn)雙熒光素活性，具體原因需進一步試驗分析。
　　總之，我們目前的研究結(jié)果表明：GnRH1作為卵巢內(nèi)調(diào)節(jié)因子，接近開產(chǎn)時GnRH1 mRNA的高表達有助于雞性成熟的啟動。在雞卵巢膜細胞中，GnRH1可介導LH與LHR受體的結(jié)合，從而影響卵巢卵泡的發(fā)育和排卵。GnRH1可與多種因子協(xié)同調(diào)控雞卵巢功能