1、黃瓜(CucumissativusL.)是普遍栽培的世界性蔬菜，也是重要的設(shè)施蔬菜，在市場(chǎng)供應(yīng)中占有重要的地位。黃瓜主要采用育苗栽培，但在育苗過(guò)程中，如果遇到高溫高濕、光照不足、水分過(guò)多等環(huán)境不適情況時(shí)，秧苗易徒長(zhǎng)，導(dǎo)致幼苗質(zhì)量下降，進(jìn)而對(duì)定植后植株的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)和生殖生長(zhǎng)產(chǎn)生影響，最終影響產(chǎn)量和品質(zhì)。植株幼苗的過(guò)度生長(zhǎng)是以赤霉素（gibbereilin，GA）為中心的激素不平衡造成的。植物中GA生物合成或信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)時(shí)，會(huì)呈現(xiàn)相應(yīng)長(zhǎng)的下胚

2、軸表型，形成徒長(zhǎng)苗。貝殼杉烯氧化酶基因（KO）是目前研究相對(duì)較多的GA生物合成限速酶基因，但黃瓜KO的克隆還未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)以黃瓜品種‘戴多星’為試材，克隆到赤霉素合成的關(guān)鍵酶-貝殼杉烯氧化酶(KO)基因cDNA全長(zhǎng)序列，比較了正常光溫條件、正常溫度結(jié)合黑色遮陽(yáng)網(wǎng)遮光及正常溫度結(jié)合黑色遮陽(yáng)網(wǎng)遮光同時(shí)噴施多效唑3個(gè)處理下，生長(zhǎng)指標(biāo)、下胚軸細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)和CKO的表達(dá)水平的差異，并通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)得到轉(zhuǎn)基因初代煙草植株，為黃瓜徒長(zhǎng)機(jī)理的研究提

3、供理論基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:
　　 1.以黃瓜品種‘戴多星’為試材，研究正常光溫條件、正常溫度結(jié)合黑色遮陽(yáng)網(wǎng)遮光及正常溫度結(jié)合黑色遮陽(yáng)網(wǎng)遮光同時(shí)噴施多效唑?qū)S瓜幼苗生長(zhǎng)狀態(tài)及下胚軸細(xì)胞超微的影響。結(jié)果表明:相比于正常條件下的幼苗，遮光使黃瓜幼苗下胚軸長(zhǎng)度顯著增加，下胚軸粗顯著降低，干重顯著減少，壯苗指數(shù)下降，表現(xiàn)出明顯的徒長(zhǎng)狀態(tài)。噴施多效唑能有效的控制幼苗徒長(zhǎng)，提高壯苗指數(shù)。超微結(jié)構(gòu)觀測(cè)表明:與正常苗相比，徒長(zhǎng)苗下胚軸細(xì)胞葉綠體長(zhǎng)

4、度變長(zhǎng)，基粒數(shù)及基質(zhì)片層垛疊增多，淀粉粒消失，嗜鋨體小球減少;線粒體增多，且發(fā)育較為成熟，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有輕微的腫脹。噴施多效唑?qū)е孪屡咻S細(xì)胞葉綠體基質(zhì)片層松散、腫脹，嗜鋨體小球增多、增大;線粒體輕微的腫脹。
　　 2.應(yīng)用同源克隆和RACE技術(shù)從黃瓜莖尖中克隆得到赤霉素合成的關(guān)鍵酶—貝殼杉烯氧化酶（KO）基因cDNA全長(zhǎng)序列，命名為CKO，GeneBank登錄號(hào)為JN792591，其長(zhǎng)度為1895bp，開(kāi)放閱讀框(ORF)編碼519個(gè)

5、氨基酸的蛋白，相對(duì)分子量為59.211kD，等電點(diǎn)(PI)為8.45。氨基酸同源性分析發(fā)現(xiàn)，CKO與苦瓜的KO氨基酸序列同源性最高，達(dá)84％;序列結(jié)構(gòu)分析表明，CKO屬于細(xì)胞色素超家族P450系，具有細(xì)胞色素P450的血紅素結(jié)構(gòu)域FXXGXRXCXG和跨膜結(jié)構(gòu)域。實(shí)時(shí)熒光定量分析表明，CKO在遮光的徒長(zhǎng)苗中表達(dá)量最高，是正常苗中的5.18倍，在遮陰條件下噴施多效唑可降低該基因的表達(dá)。
　　 3.以黃瓜品種‘戴多星’為試材，利用帶

6、酶切位點(diǎn)的引物克隆得到該品種基因組中貝殼杉烯氧化酶(CKO)基因的編碼區(qū)，將該基因插入到植物表達(dá)載體pCAMBIA1301-1中，并轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌EHA105中。通過(guò)葉盤法將CKO介導(dǎo)入煙草葉片中，利用潮霉素對(duì)轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行初步篩選，經(jīng)愈傷、分化后，對(duì)潮霉素陽(yáng)性植株進(jìn)行進(jìn)一步的PCR檢測(cè)和GUS組織化學(xué)分析。GUS組織化學(xué)分析顯示，在轉(zhuǎn)基因煙草的愈傷組織和葉中都表現(xiàn)出GUS活性;PCR檢測(cè)表明，CKO已經(jīng)整合到煙草基因組中。研究結(jié)果為進(jìn)一步