1、支原體1支原體(Mycoplasma)是一類(lèi)缺乏細(xì)胞壁、形態(tài)上呈高度多形性，可以通過(guò)一般的除菌濾器，是目前所知能獨(dú)立生活，自行繁殖的最小原核細(xì)胞型微生物。由于它們能形成有分支的長(zhǎng)絲，故稱之為支原體。概念2支原體在自然界中廣泛分布，因其缺乏細(xì)胞壁歸屬于柔膜體綱的支原體目支原體科。支原體科又分四個(gè)屬：支原體屬、血蟲(chóng)體屬、血巴爾通氏體屬和脲原體屬。對(duì)人致病的主要為肺炎支原體、人型支原體、生殖器支原體、穿通支原體和溶脲脲原體。第一節(jié)分類(lèi)3第二節(jié)

2、肺炎支原體一、臨床意義肺炎支原體(mycoplasmapneumoniaeMP)，是引起呼吸道感染的一種病原體，所引起的人類(lèi)支原體肺炎病理變化以間質(zhì)性肺炎為主，又稱之為原發(fā)性非典型性肺炎。過(guò)去認(rèn)為肺炎支原體是溫和的病原體，現(xiàn)也可引起嚴(yán)重的雙側(cè)肺炎和其他系統(tǒng)的肺外并發(fā)癥。4第二節(jié)肺炎支原體一、臨床意義肺炎支原體感染呈全球性分布，以溫帶為主。散在發(fā)病，3～5年出現(xiàn)一次地區(qū)性流行。主要經(jīng)飛沫傳染。流行特點(diǎn)為間歇性，長(zhǎng)時(shí)期緩慢播散，可持續(xù)數(shù)月至

3、一年。患者以兒童和青年人居多，冬秋季較多見(jiàn)。56二、微生物學(xué)檢驗(yàn)（一）基本特性1.形態(tài)與結(jié)構(gòu)短細(xì)絲狀，長(zhǎng)約2～5μm，在近細(xì)胞絲狀體尖端有一球狀的特殊結(jié)構(gòu)；典型的肺炎支原體形態(tài)類(lèi)似酒瓶狀，無(wú)細(xì)胞壁，僅有細(xì)胞膜，電鏡下其細(xì)胞膜由三層結(jié)構(gòu)所組成。革蘭染色陰性，Giemsa染色淡紫色。2.抗原結(jié)構(gòu)糖脂抗原：抗原性強(qiáng)，特異性差；蛋白質(zhì)抗原：P1膜蛋白是支原體的主要型特異性抗原。73.培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求高，培養(yǎng)基中必須添加10%～20%的人或動(dòng)物血

4、清，初次分離培養(yǎng)支原體，尚須添加10%的酵母浸膏，并置于5%CO2的條件下生長(zhǎng)較好。生長(zhǎng)最適pH為7.8～8.0，pH7.0以下可致其死亡，最適溫度為36～37℃。液體培養(yǎng)基中時(shí)有極淺淡的混濁；固體培養(yǎng)基上形成直徑10～100μm的菌落。初次分離時(shí)菌落呈細(xì)小的草莓狀，反復(fù)傳代后呈典型的“油煎蛋”樣菌落；半固體培養(yǎng)基中呈現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的細(xì)小粒狀菌落。（一）基本特性8（一）基本特性肺炎支原體“油煎蛋”菌落(10)94.生化反應(yīng)人類(lèi)主要支原體生物

5、學(xué)性狀（一）基本特性105.抵抗力對(duì)熱的抵抗力與細(xì)菌相似。耐冷，70℃或液氮可長(zhǎng)期凍存。如在4℃放置不要超過(guò)3d，56℃很快滅活。對(duì)干燥敏感。對(duì)青霉素、頭孢菌素等作用于細(xì)胞壁的抗菌藥物不敏感。對(duì)作用于其核蛋白體，抑制或影響菌體蛋白合成的抗菌藥物敏感，如紅霉素、強(qiáng)力霉素、螺旋霉素等。（一）基本特性11（二）肺炎支原體的檢驗(yàn)程序1.標(biāo)本采集患者痰、咽拭子、鼻咽洗液、支氣管分泌物、血清標(biāo)本等2.標(biāo)本直接檢查：1）標(biāo)本涂片2）核酸檢測(cè)PCR法：

6、快速、敏感和特異3.分離與鑒定分離培養(yǎng)：培養(yǎng)基是以牛心消化液為基礎(chǔ)另加20%小牛血清及新鮮酵母浸液制成的液體或固體培養(yǎng)基。加入適當(dāng)濃度醋酸鉈、青霉素。初次分離生長(zhǎng)緩慢，先將標(biāo)本接種于加有葡萄糖以及酚紅、美藍(lán)指示劑的液體培養(yǎng)基中增菌，1周后培養(yǎng)基由紫變綠，液體清晰，此時(shí)，可轉(zhuǎn)種于固體培養(yǎng)基上。鑒定：典型“油煎蛋”樣菌落，能發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，不能利用精氨酸與尿素，可還原美藍(lán)，能使無(wú)色的TTC還原為粉紅色的甲臢。4.抗體檢測(cè)方法有酶聯(lián)免疫吸附測(cè)

7、定、冷凝集試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)等。12（二）肺炎支原體的檢驗(yàn)程序13（二）肺炎支原體的檢驗(yàn)程序肺炎支原體固體培養(yǎng)14第三節(jié)溶脲脲原體溶脲脲原體(UreaplasmaurealyticumUu)也稱解脲脲原體，是1954年Shepard首先從非淋球菌尿道炎(NGU)患者的尿道分泌物中分離獲得，因其菌落細(xì)小，故曾稱為T(mén)支原體。按其分解尿素的特性命名為溶脲脲原體。在分類(lèi)學(xué)上屬人支原體科脲原體屬。15第三節(jié)溶脲脲原體一、臨床意義Uu

8、寄居于人泌尿生殖道，主要傳播途徑為性接觸傳播和母嬰傳播。Uu所引起的疾病最常見(jiàn)的是非淋菌性尿道炎(NGU)，Uu多寄生在男性尿道、陰莖包皮和女性陰道。若上行感染，可引起男性前列腺炎或附睪炎；女性陰道炎、宮頸炎，并可導(dǎo)致流產(chǎn)。也能引起早產(chǎn)兒及低體重新生兒呼吸道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染。16二、微生物檢驗(yàn)（一）基本特性1.形態(tài)結(jié)構(gòu)以球形為主，直徑約50~300nm，單個(gè)或呈雙排列，能通過(guò)0.45μm微孔濾膜。革蘭染色陰性，姬姆薩染色呈紫藍(lán)色。無(wú)細(xì)

9、胞壁，細(xì)胞膜由三層薄膜構(gòu)成?；蚪M大小為(4.1~4.8)108，DNA中GC含量為26.9～29.8mol%。17（一）基本特性18二、微生物檢驗(yàn)2.培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求較高，需要供給膽固醇和酵母，常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為牛心消化液或商品PPLO肉湯。生長(zhǎng)除膽固醇外，尚需尿素，Uu中的脲酶能水解尿素產(chǎn)氨，不分解葡萄糖和精氨酸。37℃生長(zhǎng)良好，22℃生長(zhǎng)差，42℃不生長(zhǎng)，最適pH為5.5~6.5。在固體培養(yǎng)基上，置于含95%N2和5%CO2氣體環(huán)

10、境下培養(yǎng)2d形成15~50μm，顆粒狀，呈“油煎蛋”樣小菌落，放大200倍才能觀察到。19（一）基本特性3.抗原構(gòu)造脂多糖抗原蛋白質(zhì)抗原脲酶抗原：是Uu種特異性抗原Uu有16個(gè)血清型，其中以第4型引起疾病的頻率最高。20（一）基本特性4.抵抗力對(duì)滲透作用敏感，易被脂類(lèi)溶媒、清潔劑、酒精、特異性抗體和補(bǔ)體溶解。對(duì)熱抵抗力差。對(duì)青霉素等作用于細(xì)胞壁的抗菌藥物不敏感，對(duì)影響胞漿蛋白合成的抗菌藥物敏感。21（二）溶脲脲原體的檢驗(yàn)程序1.標(biāo)本采集

11、患者中段尿，精液，陰道與宮頸分泌物，羊水和血液等。2.標(biāo)本直接檢查1）核酸檢測(cè):臨床快速診斷的重要手段2）ELISA:可以測(cè)定血清型別，較敏感、特異性強(qiáng)，有早期診斷意義3）免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)(IDT):較特異。3.分離與鑒定接種于pH6.00.5含有酚紅和尿素的液體培養(yǎng)基中，37℃孵育，顏色由黃變紅者判為陽(yáng)性。轉(zhuǎn)種于新的固體培養(yǎng)基上，Uu菌落呈黑褐色。此外，可作姬姆薩、革蘭染色和細(xì)胞壁染色，觀察菌體形態(tài)。Uu分解尿素，不分解葡萄糖和精氨酸。進(jìn)

12、一步鑒定則需要特異抗血清作MIT和GIT。4抗體檢測(cè)意義不大。2223解脲脲原體液體培養(yǎng)陽(yáng)性解脲脲原體固體培養(yǎng)陽(yáng)性培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性陰性24第四節(jié)其他支原體一、人型支原體人型支原體（M.hominisMh）主要寄居于生殖道，21%～53%的性成熟女性子宮頸或陰道內(nèi)可分離出Mh，男性尿道攜帶率低。通過(guò)性接觸傳播，可引起盆腔炎、輸卵管炎、產(chǎn)后熱、陰道炎與宮頸炎、腎盂腎炎等。此外，Mh也能引起新生兒感染，如腦膜炎、腦膿腫、硬腦膜下膿腫。形態(tài)結(jié)構(gòu)與溶

13、脲脲原體相似，Mh能分解精氨酸，不分解尿素和葡萄糖。培養(yǎng)最適pH為7.2～7.4，液體培養(yǎng)基中因分解精氨酸產(chǎn)氨，pH增至7.8以上易死亡。在固體培養(yǎng)基上呈典型的“油煎蛋”樣。微生物學(xué)檢驗(yàn)與溶脲脲原體相似。25第四節(jié)其他支原體二、穿通支原體1990年Lo從AIDS患者尿中分離到新的支原體，命名為穿通支原體(M.PeransMpe)，也稱穿透支原體。研究認(rèn)為Mpe、發(fā)酵支原體、梨支原體三種新支原體是加速AIDS進(jìn)程的一個(gè)協(xié)同因子。（一）臨床

14、意義Mpe的尖形結(jié)構(gòu)具有粘附和穿入作用，導(dǎo)致宿主細(xì)胞受損和死亡。研究表明Mpe對(duì)HIV感染者T細(xì)胞的作用，可能促進(jìn)HIV的復(fù)制和病程的發(fā)展。因而提出Mpe感染是艾滋病的輔助致病因素。它對(duì)誘導(dǎo)TNFα的表達(dá)可能也是造成細(xì)胞損傷的主要因素。26（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)Mpe桿狀或長(zhǎng)燒瓶狀。培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)要求高，培養(yǎng)基中需加血清，在改良的SP4培養(yǎng)基生長(zhǎng)，菌落呈“油煎蛋”樣，生長(zhǎng)較慢，發(fā)酵葡萄糖，水解精氨酸，但不分解尿素。1.標(biāo)本采集取AIDS患者或HI

15、V感染者咽部黏液，血清、尿液等2.分離培養(yǎng)與鑒定分離培養(yǎng)：SP4培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。鑒定生化反應(yīng)：發(fā)酵葡萄糖試驗(yàn)，水解精氨酸試驗(yàn)代謝抑制試驗(yàn)(MIT)PCR：套式PCR(nPCR)3.抗體檢測(cè)27小結(jié)支原體是一群缺乏細(xì)胞壁，介于細(xì)菌與病毒之間，能在人工培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖的最小的原核細(xì)胞型微生物，形態(tài)上呈高度多形性，可通過(guò)濾菌器。肺炎支原體是引起呼吸道感染的一種病原體，其P1蛋白在致病中起了重要的作用。所引起的人類(lèi)支原體肺炎病理變化以