豬繁殖與呼吸綜合征病毒兩種快速診斷方法的建立與初步研究.pdf_第1頁(yè)
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1、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的豬的一種高度傳染性疫病,又稱(chēng)“藍(lán)耳病”,本病以妊娠母豬的繁殖障礙(后期流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、弱胎)及各種年齡豬特別是仔豬的呼吸道疾?。ㄩg質(zhì)性肺炎)為主要特征。該病自從1987年首次在美國(guó)發(fā)現(xiàn)以來(lái),迅速傳播至全世界養(yǎng)豬發(fā)達(dá)的國(guó)家與地區(qū),給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

2、   本研究主要采用美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒SX-1株作為陽(yáng)性對(duì)照,選取其保守的N蛋白基因中一段高度保守的基因序列為模板,設(shè)計(jì)了4條RT-LAMP的檢測(cè)引物,通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了一種快速檢測(cè)PRRSV的RT-LAMP診斷方法。特異性和敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法能夠特異地檢測(cè)美洲型PRRSV,其最低檢測(cè)限為1×10-7ng/μL,其敏感性比常規(guī)RT-PCR高104倍,且比較穩(wěn)定,與常規(guī)RT-PCR的符合度達(dá)87%,判定檢測(cè)結(jié)果時(shí)

3、不需要借助昂貴的儀器設(shè)備,僅需加入1μL橙紅色核酸染料就可以進(jìn)行判斷,顏色變綠判定為陽(yáng)性,仍保持橙紅色判定為陰性。RT-LAMP可以快速、直觀、準(zhǔn)確地檢測(cè)PRRSV,是一種適合豬場(chǎng)現(xiàn)地應(yīng)用的檢測(cè)方法。
   運(yùn)用檸檬酸三鈉還原氯金酸方法,制備膠體金顆粒,最終選取直徑約25nm的顆粒作為標(biāo)記物,將純化的PRRSV單抗與膠體金顆粒標(biāo)記,最適標(biāo)記濃度約為12μg/ml,用噴膜儀將其兩者結(jié)合物均勻噴至玻璃纖維膜上,并于硝酸纖維素膜(NC

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