棉花乙烯合成關鍵基因參與細胞伸長發(fā)育的功能分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、乙烯(ethylene)是一種植物激素,在植物整個生命周期中起著至關重要的作用,它對植物的生長發(fā)育過程如種子萌發(fā)、果實成熟、葉片衰老、器官脫落及響應脅迫反應等有廣泛的影響。1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸氧化酶(ACO)基因是乙烯合成途徑中的最后一個關鍵酶,也稱為乙烯形成酶(EFE),許多研究表明,其對于細胞內(nèi)乙烯的合成起到重要的調(diào)控作用,并可以通過促進乙烯產(chǎn)生增強植物耐受脅迫條件的能力。
   近些年許多的ACC氧化酶(ACO)不斷地

2、從不同植物中克隆出來,其表達模式也得到廣泛的研究,利用轉(zhuǎn)基因的方法獲得的反義植株表現(xiàn)出明顯的抑制乙烯合成的特性。棉花是世界性的重要的經(jīng)濟作物,穩(wěn)定和提高棉花質(zhì)量,成為提高我國紡織品國際市場競爭力的重要內(nèi)容。本文從陸地棉中克隆了ACO基因(ACO1、ACO2和ACO3),并對其進行了序列比對,生理性狀和功能分析。具體結果如下:
   1、通過PCR反應,從棉花纖維組織cDNA中分別擴增得到GhACO1基因,大小為960bp的特異性

3、片段;GhACO2基因,大小為960bp的特異性片段;GhACO3基因,大小為954bp的特異性片段。測序結果與來自擬南芥、煙草、大豆、綠豆、蘋果、黃瓜的ACO基因有較高的同源性。
   2、構建植物表達載體p35S::GhACO1、p35S::GhACO2和p35S::GhACO3,采用花序浸染法轉(zhuǎn)化擬南芥;用葉盤法轉(zhuǎn)化煙草,卡那霉素篩選轉(zhuǎn)基因植株。獲得轉(zhuǎn)基因擬南芥純合體植株和轉(zhuǎn)基因煙草。
   3、GUS組織化學分析

4、檢測,結果表明,在轉(zhuǎn)基因擬南芥葉片中有很強的GUS活性,莖和根有微量表達。
   4、通過對轉(zhuǎn)基因擬南芥T2代植株和煙草陽性植株不定根生長發(fā)育情況的統(tǒng)計顯示,轉(zhuǎn)GhACO基因的植株的不定根數(shù)目要明顯多于野生型植株。
   5、利用NaCl和PEG6000對轉(zhuǎn)基因擬南芥T2代植株進行鹽脅迫和干旱脅迫處理,進行相關生理指標檢測,結果顯示,與野生型擬南芥相比,轉(zhuǎn)GhACO基因擬南芥對鹽脅迫和干旱脅迫的耐受性顯著性增強。

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