1、本研究用大鼠動物模型,探討轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白(human lactoferrin,hLF)基因的山羊乳對動物生長、代謝、部分免疫指標(biāo)及腸道組織形態(tài)的影響,以評價轉(zhuǎn)hLF基因山羊乳的安全性。
　　 1重組山羊乳中乳鐵蛋白的檢測
　　 隨機選取泌乳期的轉(zhuǎn)hLF基因波爾山羊和普通波爾山羊各六只,分別于產(chǎn)后3d、7d、14d、28d采集乳樣。乳樣在4℃,3500rpm離心10min,除去乳脂；用考馬斯亮藍染料結(jié)合分析法-Bradfor

2、d法測定脫脂乳中總蛋白質(zhì)濃度,SDS-PAGE比較兩種乳中蛋白質(zhì)組分的差異,Western blot分析兩種乳中乳鐵蛋白(human,LF)的表達。結(jié)果表明:LF在泌乳初期高表達,且不同泌乳階段轉(zhuǎn)hLF基因的山羊乳中LF含量均高于普通山羊乳。
　　 2轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白基因的山羊乳對大鼠代謝機能的影響
　　 30只清潔級SD大鼠,雌、雄各半,隨機分為3組,轉(zhuǎn)基因乳組每天兩次灌喂轉(zhuǎn)hLF基因山羊乳1mL/100g體重(蛋白濃度0

3、.93g·mL-1),普通乳組同一時間按上述劑量灌喂普通山羊乳(蛋白濃度0.93g·mL-1),生理鹽水組灌喂滅菌生理鹽水；自由采食、飲水,連續(xù)15天；頸部采血致死,收集血清.利用葡萄糖氧化酶-過氧化物酶終點比色法、賴氏法、脲酶法、除蛋白法、CE-COD-POD比色法等分別測定大鼠血清中血糖(Blood glucose,BG)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic-oxalacetic transaminase,GOT)及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Gluta

4、mic-pyruvic transaminase,GPT)、尿素氮(Serum urea nitrogea,SUN)、血肌酐(Serum creatinine,Scr)、血清總膽固醇(Total cholesterol,TC)含量或活性；放射性免疫分析法檢測大鼠血清中胰島素(Insulin)、胰高血糖素(Glucagon,Glu)、三碘甲狀腺素(Triiodothyroxine,T3)、甲狀腺素(Thyroxin,T4)水平.結(jié)果顯示:

5、灌喂轉(zhuǎn)hLF基因的山羊乳顯著提高了雌、雄大鼠的日增重,其中與生理鹽水組相比P<0.01,與普通乳組比P<0.05,而普通乳組與生理鹽水組相比差異不顯著；灌喂轉(zhuǎn)基因或普通山羊乳對其他表觀及生化指標(biāo)均無明顯影響(P>0.05).試驗結(jié)果表明:短期灌喂轉(zhuǎn)hLF基因的山羊乳能夠促進大鼠的生長,但對大鼠的代謝機能沒有顯著影響。
　　 3轉(zhuǎn)人乳鐵蛋白基因的山羊乳對大鼠腸道及部分免疫指標(biāo)的影響
　　 放射免疫分析法檢測大鼠十二指腸粘膜

6、中分泌性免疫球蛋白A(Secreting typeImmunoglolbulin A,SIgA)及血清中白介素-2(Interleukin-2,IL-2)水平,H.E染色法觀察大鼠十二指腸顯微結(jié)構(gòu),并統(tǒng)計腸粘膜長度；試驗結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)hLF基因的山羊乳對雌、雄大鼠腸粘膜中的SIgA及血清中IL-2水平不產(chǎn)生顯著影響,但是能夠促進大鼠腸粘膜生長.研究結(jié)果表明,轉(zhuǎn)hLF基因的山羊乳對大鼠的部分重要免疫指標(biāo)沒有負影響,但能通過促進腸粘膜生長,增