1、基因表達(dá)和調(diào)控是植物基因工程研究的重要內(nèi)容，而啟動(dòng)子在決定基因表達(dá)方面起著轉(zhuǎn)錄調(diào)控中心的作用，它在很大程度上決定著目的基因表達(dá)的時(shí)間、空間和強(qiáng)度。目前在商業(yè)化轉(zhuǎn)基因作物中使用的啟動(dòng)子往往都是組成型啟動(dòng)子，該類型啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)外源基因持續(xù)、穩(wěn)定的表達(dá)往往造成能量的非必要浪費(fèi)，增加植株的代謝負(fù)擔(dān)，同時(shí)，組成型表達(dá)外源基因還可能具有一定的潛在副作用。因此，用特異性啟動(dòng)子取代組成型啟動(dòng)子，使外源基因能夠定時(shí)、定點(diǎn)、定量地在植物中表達(dá)是植株基因工程研

2、究的重要內(nèi)容。
　　 PsbP是葉綠體光系統(tǒng)Ⅱ中放氧復(fù)合體的外周蛋白，是保證PSⅡ功能完整性不可缺少的組成部分，在水裂解過程中起著維持Ca2+濃度的作用。本文克隆了棉花GhPsbP基因的cDNA全長及啟動(dòng)子，對(duì)全長啟動(dòng)子5'端進(jìn)行了6個(gè)缺失突變，并分別構(gòu)建了7個(gè)融合GUS基因的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化煙草。對(duì)不同轉(zhuǎn)基因煙草株系進(jìn)行組織化學(xué)定位及表達(dá)分析，證明了該啟動(dòng)子為綠色組織特異表達(dá)啟動(dòng)子，確定了其結(jié)構(gòu)和功能。該啟動(dòng)子的核心區(qū)域?yàn)?1~-

3、97bp，該段序列即可驅(qū)動(dòng)GUS基因在煙草的葉片中特異表達(dá)；分離了該啟動(dòng)子中控制莖及成熟葉片特異表達(dá)區(qū)域-508~-670bp之間的162bp的重要區(qū)段，其中出現(xiàn)頻率較高的5'-TTTTA-3'和5'-TATAAAT-3'基序可能是潛在的正調(diào)控元件，也可能與成熟葉片和莖桿中的特異表達(dá)相關(guān)；-1055~-2077bp區(qū)段分布著增強(qiáng)子元件，2077bp片段啟動(dòng)子的效率是核心啟動(dòng)子的5倍，啟動(dòng)子全長序列較之缺失突變體的表達(dá)效率最高。
　

4、　 構(gòu)建了棉花GhPsbP全長啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)CP4 epsps基因的植物表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化煙草獲得32株轉(zhuǎn)基因植株，分析了epsps在轉(zhuǎn)基因植株中的表達(dá)情況，結(jié)果表明：GhPsbP可以驅(qū)動(dòng)功能基因CP4 epsps在煙草的綠色組織特異表達(dá)，其在莖葉綠色組織中的表達(dá)量足以抵抗工作濃度草甘膦的毒害。獲得了抗性較強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因煙草株系，為今后開展抗草甘膦轉(zhuǎn)基因工作選擇適宜的基因材料及表達(dá)調(diào)控元件提供了有力的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為綠色組織特異性啟動(dòng)子的