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文檔簡介
1、棉花是重要的經濟作物,由于棉花生產長期受到雜草侵害,造成的直接經濟損失占作物總產值的10%~20%左右。棉花基因工程的發(fā)展大大促進了抗除草劑、抗蟲、抗病、抗逆和高品質纖維等棉花品種的培育,但轉基因棉花體系仍然存在著許多尚未解決的問題,如再生品種少、胚狀體萌發(fā)率偏低、畸形率較高、再生周期長等問題,所以,不斷發(fā)展新的再生體系和拓寬棉花轉基因的品種數(shù)量是目前棉花基因工程發(fā)展的新趨勢。
本試驗以六種不同基因型棉花為試材,探討棉花再
2、生過程中,各種因素對棉花組織培養(yǎng)再生體系的影響,以建立具有良好的穩(wěn)定性和重復性、易于再生、有高再生頻率的棉花基因轉化受體系統(tǒng)。同時通過農桿菌介導法將抗除草劑als、bar基因轉入棉花中,并對棉花莖尖遺傳轉化體系進行優(yōu)化,為完善農桿菌介導抗除草劑棉花莖尖遺傳轉化技術,選育出抗除草劑的棉花新品種提供理論和實驗基礎。
主要研究結果如下:
1.從供試的六種基因型棉花中篩選出兩種有胚性愈傷組織產生的基因型。分別是華抗6
3、號和06S62。
2.以華抗6號和06S62為材料,優(yōu)化再生體系。愈傷組織誘導培養(yǎng)基的適宜配方為:MSB+30 g/L葡萄糖+0.1mg/L2,4-D+0.1mg/LZT+8g/L瓊脂;分化培養(yǎng)基的適宜配方為:MSB+30g/L葡萄糖+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+8g/L瓊脂;生根培養(yǎng)基的適宜配方為:MSB+30g/L葡萄糖+0.1mg/L6-BA+1.0mg/LNAA+10g/L瓊脂+2g/L活性炭。<
4、br> 3.農桿菌LBA4404轉化als基因的適宜條件,華抗6號的菌液濃度OD6000.9、浸染時間為10 min、負壓處理10 min、添加500μmol/LAS;06S62的菌液濃度OD6000.9、浸染時間15 min、負壓處理15 min、添加500μmol/L AS。
4.農桿菌LBA4404轉化bar基因的適宜條件,華抗6號的菌液濃度OD6000.7、浸染時間為10 min、負壓處理10 min、添加5
5、00μmol/L AS;06S62的菌液濃度OD6000.9、浸染時間15 min、負壓處理15 min、添加500μmol/L AS。
5.通過轉化als基因,華抗6號獲得了25株抗性幼苗,06S62獲得了17株抗性幼苗,分別隨機選取10株抗性幼苗,取葉片做PCR檢測,均有陽性植株產生且最高轉化率為5.71%。
6.通過轉化bar基因,華抗6號獲得了30株抗性幼苗,06S62獲得了22株抗性幼苗,分別隨機選
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