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1、匍匐翦股穎(AgrostisstoloniferaL.)是一種很重要的多年生冷地型草坪草,具有耐修剪、觀賞性高等優(yōu)點(diǎn),常用于高爾夫球場(chǎng)果嶺及高檔草坪中。本研究探究了誘導(dǎo)匍匐翦股穎愈傷組織的最佳條件,建立了高頻再生體系。并對(duì)匍匐翦股穎愈傷組織進(jìn)行了玻璃化超低溫保存,為匍匐翦股穎細(xì)胞工程和基因工程奠定了理論和實(shí)踐基礎(chǔ),同時(shí)對(duì)匍匐翦股穎屬種質(zhì)資源長(zhǎng)期保存提供了依據(jù)。主要研究結(jié)果如下: 1.建立了匍匐翦剪股穎再生體系:分別以A-4、A-
2、1、帕特三個(gè)品種成熟種子為外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo),其中品種A-4的愈傷組織誘導(dǎo)率最高,可達(dá)74.7%;2,4-D是影響愈傷組織誘導(dǎo)的最重要激素,以4mg/L為宜,愈傷組織誘導(dǎo)率為73.2%;在MS+4mg/L2,4-D+0.3mg/L6-BA+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L中可顯著提高愈傷組織誘導(dǎo)率,愈傷組織誘導(dǎo)率可達(dá)78.6%;繼代培養(yǎng)條件:MS+2mg/L2,4-D+0.1mg/L6-BA+0.3mg/LABA+500mg/L水解酪蛋
3、白中對(duì)愈傷組織進(jìn)行繼代培養(yǎng),胚性愈傷組織發(fā)生率可達(dá)36.8%;芽分化:在基本培養(yǎng)基中添加2mg/L6-BA,芽的分化率在80%以上;根的誘導(dǎo):在1/2MS培養(yǎng)基中添加0.5mg/LNAA; 2.探索了玻璃化超低溫保存體系:將繼代兩次的愈傷組織在4℃低溫度下預(yù)培養(yǎng)5天,常溫下用裝載液(2mol/l甘油+0.4mol/l蔗糖)過(guò)渡10min,再于0℃下用玻璃化溶液PVS2處理50min,換成新鮮的PVS2迅速投入液氮中保存一小時(shí)以上
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