1、凡納濱對蝦，也叫太平洋白對蝦(pacific white shrimp，Litopenaeus vannamei)，是世界最重要的經濟對蝦之一。隨著凡納濱對蝦養(yǎng)殖產量迅速增長，細菌性和病毒性引起的的疾病，尤其是白斑綜合癥病毒(white spot syndrome virus，WSSV)，日趨嚴重并且威脅著世界各產蝦國的對蝦產業(yè)。因此，研究對蝦先天免疫，調查宿主病原之間的相互關系已成為當務之急，其也可為對蝦養(yǎng)殖健康管理和疾病控制提供新的

2、視角。 Rel/NF—кB轉錄因子在諸多重要生理或病理過程中都起著核心作用，如細胞凋亡、增殖、分化，而且還調控先天性和獲得性免疫反應和應激反應相關基因表達的轉錄。果蠅中，已鑒定出三個Rel/NF—кB轉錄因子：Dorsal、Dif和Relish已經，其可調控下游效應因子如抗菌肽基因的轉錄。 直到目前，對蝦先天免疫尤其是分子水平上的相關知識依舊所知甚少，僅有有限的免疫相關蛋白/基因已被報道參與對蝦免疫應答。在此，我們報道

3、鑒定了對蝦的Rel/NF—кB轉錄因子，LvDorsal，LvRelish及其短的剪輯異構體sLvRelish。 利用簡并引物擴增及5’和3’ cDNA末端快速擴增(RACE)，獲得Rel/NF—кB在凡納濱對蝦中的同源基因，LvDorsal(GenBank accession No．FJ998202)，LvRelish(GenBank accession No．EF432734)及sLvRelish(GenBank acces

4、sion No．FJ416146)，并通過基因組擴增獲取了LvRelish基因結構(GenBank accession No．FJ416145)。 LvDorsal的cDNA序列全長為2193bp，開放閱讀框有1200bp，編碼400個氨基酸的蛋白(不包含終止子)。生物信息學分析表明，LvDorsal含有一個Rel同源性結構域(Rel homology domain，RHD)和一個核定位信號(nucleus localizat

5、ion signal，NLS)，屬于NF—кB類型Ⅱ。LvRelish的cDNA序列全長為4071bp，開放閱讀框有3624 bp，編碼1207個氨基酸的蛋白，序列分析預測表明LvRelish的N端含有一個RHD結構域，一個NLS，C端則含有6個ANK(ankyrin repeat)結構域即IкB類似結構域和一個死亡結構域(Death domain，DD)，屬NF—KB類型Ⅰ。sLvRelish的cDNA序列全長為1054 bp，開放閱

6、讀框有951 bp，編碼317個氨基酸的蛋白，sLvRelish跟LvRelish在RHD結構域中有273aa相同，包含RHD大部分，但沒有NLS，ANK和DD。所擴增的LvRelish基因組序列約15 kb，其基因組結構共有22個外顯子，包含LvRelish的幾乎全部和sLvRelish的全部cDNA序列。 逆轉錄PCR(RT—PCR)表明LvDorsal和LvRelish的mRNA在各組織表達有所不同。LvRelish和sL

7、vRelish在同一組織，兩者表達水平基本類似，兩者在不同組織之間表達水平量都變化較大，而LvDorsal組織分布表達則相對比較均一。鰓組織Northern blot可檢測出LvRelish，但未能檢測出LvDorsal。Western blot分析表明在S2細胞中表達的LvRelish可被剪切成兩部分，且N端可入核。免疫熒光分析也表明LvDorsal和LvRelish產物可以入核。通過EMSA實驗，顯示LvDorsal和LvRelis

8、h的RHD在體外可結合果蠅抗菌肽кB基序，證實LvDorsal和LvRelish為NF—кB轉錄因子。利用EMSA實驗進一步證明LvRelish的RHD可結合凡納濱對蝦抗菌肽penaeidin—4調控區(qū)域的кB基序。此外，通過構建果蠅pGL3Attacin及pGL3Drosomycin和凡納濱對蝦抗菌肽penaeidin—4報告基因載體，利用雙熒光素酶報告系統(tǒng)表明LvDorsal，LvRelish和LvSTAT可調控凡納濱對蝦抗菌肽pe