1、轉(zhuǎn)錄后基因沉默是植物自身抵抗植物病毒侵染的一種保護機制，實踐證明通過轉(zhuǎn)基因在植物體內(nèi)表達植物病毒的某個完整基因或者基因部分片段的雙鏈RNA(dsRNA)均能獲得高抗的轉(zhuǎn)基因植株。也有研究表明在植物體外表達或合成植物病毒某個完整基因的dsRNA，也能誘導(dǎo)植物提高自身對病毒的抗性。但在體外表達僅含有植物病毒部分基因片段的dsRNA，能否也能誘導(dǎo)植物的抗病性還未見報道。
　　 本研究以馬鈴薯Y病毒壞死株系CP基因為基礎(chǔ)，以L4440為

2、載體構(gòu)建了兩個含有部分PVYN-CP基因片段的dsRNA原核表達載體，將其轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株HT115(DE3)，獲得了相應(yīng)的轉(zhuǎn)化體，誘導(dǎo)表達產(chǎn)生了相關(guān)的dsRNA，并對產(chǎn)生的dsRNA進行了誘導(dǎo)抗病毒試驗，主要結(jié)果如下:
　　 1、RT-PCR獲得了PVYN-CP全長基因序列，并以此為基礎(chǔ)構(gòu)建了含有PVYN-CP基因5'端264bp和中間253bp的反向重復(fù)兩個原核表達載體LL-LS-L4440和ML-MS-L4440;

3、　　 2、將其分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株HT115，獲得了相應(yīng)的轉(zhuǎn)化體。含有ML-MS-L4440的轉(zhuǎn)化體經(jīng)過IPTG誘導(dǎo)表達，獲得了相應(yīng)的dsRNA，并通過在不同時間添加IPTG，確定了高產(chǎn)dsRNA的IPTG最佳誘導(dǎo)時期;通過比較不同的dsRNA提取方法，最終確定了LiCl沉淀法提取dsRNA比較理想。
　　 3、用表達dsRNA的滅活細菌液和dsRNA提純液及其100倍稀釋物處理煙草進行攻毒的試驗，結(jié)果證明表達dsRNA的滅活

4、細菌溶液和dsRNA提純液及其100倍稀釋物均能降低PVYN在煙草體內(nèi)的含量，減輕PVYN對煙草的為害，表明含有PVYN-CP部分基因片段的體外表達的dsRNA能夠誘導(dǎo)植物對病毒產(chǎn)生抗病性。
　　 上述結(jié)果證實利用轉(zhuǎn)錄后基因沉默機制，構(gòu)建含有部分植物病毒基因片段的原核表達載體，在特定的細菌菌株中誘導(dǎo)表達相應(yīng)的dsRNA，用其滅活的細菌溶液和dsRNA提純液處理煙草，可誘導(dǎo)植物的病毒的抗性，這為誘導(dǎo)植物抗病毒的策略的制定奠定了基礎(chǔ)