1、家蠶追寄蠅(Exorista sorbillans)寄生于家蠶幼蟲(chóng)體壁與肌肉間引起的多化性蠶蛆病對(duì)蠶業(yè)生產(chǎn)危害極大。近幾十年來(lái)，關(guān)于家蠶追寄蠅的研究多集中在生物學(xué)和防治等方面，對(duì)家蠶追寄蠅寄生后的家蠶體內(nèi)生理生化變化方面研究較少，從分子水平上探究家蠶追寄蠅寄生對(duì)家蠶生長(zhǎng)與發(fā)育進(jìn)程和分子免疫應(yīng)答機(jī)制更是空缺，因此本文主要從核酸和蛋白質(zhì)水平研究蠅蛆寄生后對(duì)家蠶生長(zhǎng)發(fā)育與分子免疫的影響，以期闡述寄生后的家蠶生長(zhǎng)發(fā)育、免疫應(yīng)答等生物學(xué)問(wèn)題，尋找

2、家蠶蠅蛆病防治的切合點(diǎn)，為提高蠶桑生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益和抗病育種等提供重要的參考。研究結(jié)果如下：
　　1、家蠶追寄蠅寄生對(duì)家蠶危害調(diào)查及寄生部位觀察
　　追寄蠅寄生后家蠶的死亡率調(diào)查結(jié)果顯示，4齡初期和5齡初期寄生的家蠶大部分死亡，4齡3天、5齡3天和5齡4天寄生的家蠶死亡率顯著降低。觀察并記錄了家蠶追寄蠅寄生蠶體后寄生部位隨發(fā)育時(shí)間的變化而呈現(xiàn)的不同特征。對(duì)即將出蛆的蠶體進(jìn)行解剖，可觀察到寄生在蠶體內(nèi)的蛆；羽化后的解剖觀察，發(fā)現(xiàn)

3、包裹物（體）將寄生的蛆體包圍并致其死亡。
　　2、家蠶追寄蠅寄生蠶體血液的蛋白組學(xué)研究
　　5齡第1天的家蠶被追寄蠅寄生后，對(duì)5齡第4天、5齡第6天、化蛹第2天、化蛹第4天和化蛹第6天寄生家蠶血液和正常情況下對(duì)應(yīng)時(shí)期家蠶血液進(jìn)行了SDS-PAGE電泳，結(jié)果顯示：化蛹第2天的家蠶血液蛋白組分和其他時(shí)期相比變化顯著，且在這個(gè)時(shí)期家蠶停止食桑，家蠶追寄蠅和家蠶生長(zhǎng)發(fā)育所需的能源物質(zhì)均來(lái)自家蠶本身儲(chǔ)存的能源物質(zhì)。因此采用被寄生的家蠶

4、化蛹第2天和正常情況下對(duì)應(yīng)時(shí)期的家蠶血液為材料，構(gòu)建了寄生組和對(duì)照組血液的雙向電泳圖譜，應(yīng)用質(zhì)譜技術(shù)成功鑒定的差異蛋白點(diǎn)有49個(gè)，其中上調(diào)表達(dá)的有35個(gè)蛋白點(diǎn)，下調(diào)表達(dá)有14個(gè)蛋白點(diǎn)，在上調(diào)表達(dá)的蛋白質(zhì)中，有3個(gè)與家蠶免疫相關(guān)的蛋白質(zhì)—肽聚糖識(shí)別蛋白-S1、C-型凝集素-10和酚氧化酶-2；下調(diào)表達(dá)的蛋白質(zhì)中有與家蠶生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)的蛻皮激素調(diào)節(jié)蛋白前體。研究結(jié)果表明，當(dāng)追寄蠅寄生于蠶體后激活了家蠶的先天免疫系統(tǒng)，同時(shí)也影響了家蠶的生長(zhǎng)發(fā)育

5、。
　　利用GO分類對(duì)鑒定到的蛋白進(jìn)行功能分析：49個(gè)蛋白質(zhì)中37個(gè)蛋白質(zhì)獲得至少一個(gè)GO號(hào)，這些蛋白質(zhì)被分為三大類，主要參與細(xì)胞成分、分子功能和生物過(guò)程。對(duì)這些蛋白質(zhì)進(jìn)行KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)pathway分析，他們主要分為代謝，遺傳信息處理，環(huán)境信息處理，細(xì)胞過(guò)程，有機(jī)體系統(tǒng)和人類疾病五大類。它們具體主要參與蛋白吸收和消化、碳水化合物代謝、解毒代謝及免疫反應(yīng)過(guò)

6、程等。
　　3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證分析
　　對(duì)于雙向電泳得到的差異蛋白，我們選取了幾個(gè)關(guān)鍵蛋白—肽聚糖識(shí)別蛋白-S1、C-型凝集素-10和酚氧化酶-2和蛻皮激素調(diào)節(jié)16 kDa蛋白前體，運(yùn)用生物信息學(xué)方法結(jié)合家蠶全基因組數(shù)據(jù)、基因芯片數(shù)據(jù)，對(duì)以上差異蛋白及其基因進(jìn)行了分析，并利用熒光定量PCR的方法對(duì)其進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果顯示：只有酚氧化酶-2沒(méi)有信號(hào)肽序列，以上四個(gè)基因均在脂肪體內(nèi)高量表達(dá)；被追寄蠅寄生后家蠶的肽聚糖識(shí)別蛋