1、1微生物大小及數(shù)量的測定微生物大小及數(shù)量的測定09級生科一班安明玉（200900140001）同組者：陳汶燦、陳肖然、程彬、高琳璐、秦瑤一、一、實驗目的實驗目的1.學習并掌握用測微尺測定微生物細胞大小的方法。2.了解血細胞計數(shù)板的構造及計數(shù)原理。3.掌握使用血細胞計數(shù)板進行微生物計數(shù)的方法。二、實驗原理二、實驗原理1.微生物大小測定原理微生物細胞的大小是微生物的形態(tài)特征之一，也是分類鑒定的依據(jù)之一。其測量工具有目鏡測微尺和鏡臺測微尺。鏡

2、臺測微尺是中央部分刻標準刻尺的載玻片，其尺度總長為1mm，精確分為10個大格，每個大格又分為10個小格，共100小格，每一小格長度為0.01mm，即10μm。如圖1。圖1鏡臺測微尺中央部分及鏡臺測微尺校正目鏡測微尺目鏡測微尺，如圖2，是一塊可放入接目鏡內(nèi)的圓形小玻片，其中央有精確的等分刻度，一般有等分為50小格和100小格兩種。測量時，需將其放在接目鏡中的隔板上，用以測量經(jīng)顯微放大后的細胞物象。由于不同顯微鏡或不同的目鏡和物鏡組合放大倍

3、數(shù)不同，目鏡測微尺每小格在不同條件下所代表的實際長度也不一樣。圖2目鏡測微尺2.血球計數(shù)板測定微生物數(shù)量的原理血細胞計數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由4條槽構成3個平臺。中間較寬的平臺又被一段橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各刻有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分9個大方格，中間的大方格即為計數(shù)室。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成25個中3用同樣的方法換成高背景和油鏡進行校正，分別測出在高倍鏡和油鏡下，兩重合線之間兩尺分別所占的格數(shù)。

4、(注意：觀察時光線不宜過強，否則難以找到鏡臺微尺的刻度；換高倍鏡和油鏡校正時，務必十分細心，防止接物鏡壓壞鏡臺微尺和損壞鏡頭。)（3）對枯草芽孢桿菌用簡單染色法制片（4）菌體大小的測定①枯草芽孢桿菌大小的測定目鏡測微尺校正完畢后，取下鏡臺測微尺，換上細菌染色制片。先用低倍鏡和高倍鏡找到標本后，換油鏡測枯草芽孢桿菌的寬度和長度。測定時，通過轉(zhuǎn)動目鏡微尺和移動載玻片，測出細菌直徑或?qū)捄烷L所占目鏡測微尺的格數(shù)。最后將所測得的格數(shù)乘以目鏡測微尺

5、（用油鏡時）每格所代表的長度，即為該菌的實際大?、诮湍妇笮〉臏y定測定酵母菌時，先將酵母菌培養(yǎng)物制成水浸片，然后用高倍鏡或油鏡測出寬和長各占目鏡微尺的格數(shù)，最后，將測得的格數(shù)乘上目鏡微尺（用高倍鏡或油鏡時）每格所代表的長度，即為酵母菌的實際大?。ㄗ⒁猓嚎蛇x擇有代表性的3~5個細胞進行測定；細菌的大小需用油鏡測定，以減少誤差）（5）測定完畢，取出目鏡測微尺后將接目鏡放回鏡筒，再將目鏡測微尺和鏡臺測微尺分別用擦鏡紙擦拭干凈，放回盒內(nèi)保存。2

6、、顯微鏡直接計數(shù)法（1）鏡檢計數(shù)室在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進行鏡檢。若有污物，則需清洗，吹干后才能進行計數(shù)。（2）加樣品將清潔干燥的血細胞計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自動進入計數(shù)室，一般計數(shù)室均能充滿菌液（注意：要搖勻菌液；加樣時計數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生）（3）顯微鏡計數(shù)5min，然后將血細胞計數(shù)板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數(shù)室所在位置，然后換成高倍

7、鏡進行計數(shù)。調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強弱適當，對于用反光鏡采光的顯微鏡還要注意光線不要偏向一邊，否則視野中不易看清楚計數(shù)室方格線，或只見豎線或只見橫線。（4）清洗血細胞計數(shù)板完畢后，將血細胞計數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干，鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復洗滌至干凈為止。五、實驗結果五、實驗結果1菌體大小的測量(1)目鏡測微尺校正結果物鏡物鏡倍數(shù)目鏡測微尺格數(shù)鏡臺測微尺格數(shù)目鏡測微尺每