1、作者簡(jiǎn)介:林菲菲女碩士研究生??研究方向:藥物分析??通訊作者:鐘大放男教授博士生導(dǎo)師??研究方向:藥物分析??TelFax:(021)50800738??E?mai:ldfzhong@mail?shcnc?ac?cn液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定人血漿中環(huán)酯紅霉素林菲菲12陳笑艷2戴曉健2鐘大放12(1.蘇州大學(xué)江蘇蘇州2150062.中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所上海201203)摘要:目的?建立快速、靈敏的液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定人血漿中環(huán)酯

2、紅霉素的濃度。方法?50?L血漿樣品經(jīng)正己烷?二氯甲烷?異丙醇(300?150?15)液?液萃取后以甲醇?5mmolL1醋酸銨?甲酸溶液(75?25?0?2)為流動(dòng)相采用CapcellPakC18MG(2?0mm!35mm3?m)柱分離。使用電噴霧電離源以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)方式進(jìn)行正離子檢測(cè)。結(jié)果?測(cè)定血漿中環(huán)酯紅霉素線性范圍為1?00~2000ngmL1定量下限為1?00ngmL1靈敏度提高了20倍。日內(nèi)、日間精密度(RSD)均小于

3、9?6%準(zhǔn)確度(RE)在?0?9%以內(nèi)。環(huán)酯紅霉素和內(nèi)標(biāo)羅紅霉素的回收率分別為80?4%和79?3%。每個(gè)樣品分析時(shí)間為2?5min。結(jié)論?該方法靈敏度高、選擇性強(qiáng)、準(zhǔn)確快速適用于環(huán)酯紅霉素片人體生物等效性研究。關(guān)鍵詞:環(huán)酯紅霉素液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法生物等效性血漿藥物濃度中圖分類號(hào):R917???文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A???文章編號(hào):10012494(2010)13102004DeterminationofErythromycinCyclic1

4、112?CarbonateinHumanPlasmabyLC?MSMSMethodLINFei?fei12CHENXiao?yan2DAIXiao?jian2ZHONGDa?fang12(1.SoochowUniversitySuzhou215006China2.ShanghaiInstituteofMateriaMedicaChineseAcademyofSciencesShanghai201203China)ABSTRACT:OBJ

5、ECTIVE?Todevelopaliquidchromatography?temmassspectrometric(LC?MSMS)methodfthedetermina?tionoferythromycincyclic1112?carbonateinhumanplasma?METHODS?Analiquotof50?Lplasmasamplewasextractedbyn?hex?ane?dichlomethane?isopropa

6、nol(300?150?15)thenseparatedonaCapcellPakC18MG(2?0mm!35mm3?m)columnusingmetha?nol?5mmolL1ammoniumacetate?fmicacid(75?25?0?2)?Atemmassspectrometerequippedwithelectrosprayionizationsourcewasusedasdetectoperatedinthepositiv

7、eionmode?Quantificationwasperfmedusingmultiplereactionmoniting(MRM)ofthetransitionsmz761#mz158mz838#mz158ferythromycincyclic1112?carbonateinternalstardroxithromycinasinternalstardrespectively?RESULTS?Thelinearcalibration

8、curveswereobtainedintheconcentrationrangefrom1?00to2000ngmL1?Thelowlmiitofquantificationwas1?00ngmL1thesensitivitywaselevatedbyatleast20tmiescomparedwiththemethodsmentionedintheliterature?Theintra?dayinter?dayrelativesta

9、rddeviationovertheentireconcentrationrangewasbelow9?6%?Theaccuracywaswithin?0?9%intermsofrelativeerr?Themeanrecoverywas80?4%79?3%ferythromycincyclic1112?carbonateinternalstardroxithromycinrespectively?Thetotalchromatogra

10、phicruntmiewas2?5min?CONCLUSION?Thismethodwassen?sitiveselectiverapidsuitabletoevaluatethebioequivalenceoftwoerythromycincyclic1112?carbonatetablets?KEYWDS:erythromycincyclic1112?carbonateliquidchromatography?temmassspec

11、trometrybioequivalenceplasmacon?centration??環(huán)酯紅霉素是紅霉素環(huán)1112?碳酸酯是由波蘭華沙制藥工業(yè)研究所首先合成的一種紅霉素衍生物[1]屬于大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對(duì)革蘭陽(yáng)性菌及支原體有較好的抗菌活性。由于紅霉素及其衍生物的吸收光譜多在紫外末端區(qū)采用紫外檢測(cè)很難建立靈敏度高的檢測(cè)方法。生物樣品中環(huán)酯紅霉素的測(cè)定方法文獻(xiàn)報(bào)道的有微生物瓊脂平皿擴(kuò)散法[2?3]和LC?MS法[4]定量下限分別為20ngm

12、L1和25ngmL1。文獻(xiàn)[4]建立的LC?MS法未對(duì)基質(zhì)效應(yīng)血漿樣品的提取回收率及血漿樣品的穩(wěn)定性情況等進(jìn)行報(bào)道且靈敏度不夠高難以跟蹤低劑量的完整藥?時(shí)曲線。因此本試驗(yàn)旨在建立更靈敏、快速的LC?MSMS測(cè)定人血漿中的環(huán)酯紅霉素的濃度并用于環(huán)酯紅霉素片人體生物等效性研究。1?儀器與材料1?1?藥品與試劑環(huán)酯紅霉素對(duì)照品(純度98?01%批號(hào)080829A香港澳美制藥廠)羅紅霉素(純度100%批號(hào)130351?200102中國(guó)藥品生物制

13、品檢定所)參比制劑(環(huán)酯紅霉素片波蘭波爾法?塔赫敏制藥股份有限公司每片250mg批號(hào)91107)受試1020ChinPharmJ2010JulyVol?45No?13?????????????中國(guó)藥學(xué)雜志2010年7月第45卷第13期內(nèi)標(biāo)的測(cè)定。2?7?線性范圍和定量下限取空白血漿50?L加入環(huán)酯紅霉素標(biāo)準(zhǔn)系列溶液50?L配制成相當(dāng)于環(huán)酯紅霉素血漿濃度分別為1?003?0010?030?01003001000和2000ngmL1的樣品按

14、%2?3以待測(cè)物濃度為橫坐標(biāo)待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)用加權(quán)(w=1x2)最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算求得的直線回歸方程即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。環(huán)酯紅??圖2?測(cè)定血漿中環(huán)酯紅霉素及內(nèi)標(biāo)羅紅霉素的典型MRM色譜圖A空白血漿B空白血漿加入環(huán)酯紅霉素至1?00ngmL1和內(nèi)標(biāo)羅紅霉素至100ngmL1C一名受試者服藥后8h血漿樣品?環(huán)酯紅霉素(羅紅霉素Fig?2?MRMChromatogramsoferythromycincyclic1112?ca

15、r?bonateroxithromycininhumanplasmasamplesAblankplasmasampleBblankplasmaspikedwitherythromycincyclic1112?carbonate1?00ngmL1roxithromycin100ngmL1Cplasmasamplecol?lected8hafteranaladministrationof500mgerythromycincyclic1112

16、?carbonatetoahealthyvolunteer?erythromycincyclic1112?carbonate(roxithromycin霉素的典型回歸方程為y=0?0163x7?07!103r=0?9987線性范圍為1?00~2000ngmL1。在方法確證第一天對(duì)血漿濃度為1?00ngmL1的環(huán)酯紅霉素樣品進(jìn)行6樣本分析并根據(jù)當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算每一樣本測(cè)得濃度。求得該濃度的日內(nèi)精密度為8?1%準(zhǔn)確度(RE)為4?0%。該結(jié)

17、果表明LC?MSMS測(cè)定血漿中環(huán)酯紅霉素的定量下限可達(dá)1?00ngmL1。2?8?精密度與準(zhǔn)確度取空白血漿50?L配制低、中、高3個(gè)濃度(環(huán)酯紅霉素血漿濃度分別為3?00500和1600ngmL1)的質(zhì)量控制(QC)樣品每一濃度進(jìn)行6樣本分析連續(xù)測(cè)定3d根據(jù)當(dāng)日的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算QC樣品的測(cè)得濃度結(jié)果進(jìn)行方差分析計(jì)算方法的準(zhǔn)確度與精密度。在3種濃度下環(huán)酯紅霉素QC樣品的日內(nèi)精密度在3?9%和6?0%之間日間精密度在5?2%和9?6%之間RE

18、在0?8%和0?9%之間。結(jié)果表明本方法精密、準(zhǔn)確符合有關(guān)國(guó)際規(guī)范[5]的要求。2?9?提取回收率、基質(zhì)效應(yīng)和穩(wěn)定性考察考察了低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度(環(huán)酯紅霉素血漿濃度分別為3?00500和1600ngmL1)的提取回收率(n=6)。以提取后的色譜峰面積與未經(jīng)提取獲得的峰面積之比計(jì)算提取回收率。環(huán)酯紅霉素3種質(zhì)量濃度下樣品的提取回收率分別為82?2%、79?1%和80?0%內(nèi)標(biāo)物的提取回收率為79?3%。分別取6名受試者空白血漿50?L

19、經(jīng)液?液萃取處理后加入環(huán)酯紅霉素和羅紅霉素的混合溶液配制成環(huán)酯紅霉素質(zhì)量濃度為3?00和1600ngmL1內(nèi)標(biāo)羅紅霉素質(zhì)量濃度為100ngmL1的樣品進(jìn)行LC?MSMS分析獲得峰面積。與另取水50?L代替空白血漿按上述處理獲得的相應(yīng)峰面積(3次測(cè)定平均值)相比評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)環(huán)酯紅霉素的基質(zhì)效應(yīng)在98?9%和102%之間內(nèi)標(biāo)物為101%相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差均小于1?9%。結(jié)果表明在本試驗(yàn)選擇的色譜和質(zhì)譜條件可有效避免血漿基質(zhì)效應(yīng)[6]。考察了環(huán)酯紅霉