1、農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)技術(shù)對(duì)保護(hù)廣大消費(fèi)者身體健康、避免急性食物中毒事件的發(fā)生，具有重要意義。本文針對(duì)以往農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)中存在的一些問(wèn)題進(jìn)行了比較深入的探討，在此基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)出一套農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)設(shè)備，并應(yīng)用于實(shí)際蔬菜樣品的檢測(cè)。 首先，本文對(duì)以往大多數(shù)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)中使用的快速提取方法進(jìn)行了研究。在以前的方法中主要通過(guò)使用磷酸緩沖液或甲醇水溶液對(duì)蔬菜樣品進(jìn)行簡(jiǎn)單的表面漂洗，以實(shí)現(xiàn)對(duì)農(nóng)藥殘留的提取。作者通過(guò)向蔬菜表面添加不

2、同濃度的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)樣品，分別采用磷酸緩沖液和甲醇水溶液進(jìn)行農(nóng)藥殘留的表面提取，并采用氣相色譜進(jìn)行測(cè)定，最終確定了表面漂洗法對(duì)敵敵畏、甲胺磷、呋喃丹、樂(lè)果、抗蚜威、甲基對(duì)硫磷6種農(nóng)藥的提取效率。結(jié)果表明，表面漂洗法的提取效率受添加完畢后在室溫下放置時(shí)間長(zhǎng)短的影響。當(dāng)放置2h時(shí)，表面漂洗法對(duì)6種農(nóng)藥的提取效率可達(dá)到80％以上，但是當(dāng)放置時(shí)間延長(zhǎng)到4～5h以后，對(duì)6種農(nóng)藥的提取效率急劇下降，一般在20％～40％之間。作者經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，提出一種采

3、用微型組織搗碎機(jī)的快速提取方法，使用這種方法可使6種農(nóng)藥的提取效率達(dá)到70％以上。 其次，本文對(duì)乙酰膽堿酯酶的固定化技術(shù)進(jìn)行了研究。采用交聯(lián)法對(duì)酶進(jìn)行固定是一種廣泛采用的固定化方法，本文對(duì)影響固化乙酰膽堿酯酶活性的固定化條件，諸如pH值、BSA、GA、明膠的最佳使用濃度進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。經(jīng)交聯(lián)法固定的乙酰膽堿酯酶，在室溫下放置6個(gè)月以后酶活性仍可保持60％以上。但是采用交聯(lián)法對(duì)酶進(jìn)行固定化過(guò)程中必須使用雙功能試劑戊二醛，此試劑本身

4、會(huì)對(duì)乙酰膽堿酯酶的活性造成較大傷害，所以經(jīng)固定化以后酶的活力回收率較低。目前，一種光交聯(lián)試劑聚乙烯醇苯乙烯吡啶(PVA-SbQ)在酶的固定化過(guò)程中倍受青睞，本文在實(shí)驗(yàn)室合成出PVA-SbQ。經(jīng)PVA-SbQ固定后的乙酰膽堿酯酶具有較高的活性回收率，而且在室溫下放置6個(gè)月后，固化乙酰膽堿酯酶的活性仍可保持初始固化酶活性的70％以上。 第三，為了提高對(duì)農(nóng)藥殘留檢測(cè)結(jié)果判斷的準(zhǔn)確性，本研究采用酶標(biāo)儀對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行讀數(shù)測(cè)量，以代替目視觀

5、察結(jié)果的方法。酶標(biāo)儀通常是針對(duì)酶聯(lián)免疫法測(cè)定黃曲霉素等毒素開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)的，為將酶標(biāo)儀應(yīng)用到對(duì)農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)上，本文專門編寫了一套應(yīng)用軟件，使酶標(biāo)儀能實(shí)現(xiàn)對(duì)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。該軟件具有較好的人機(jī)交互界面，能夠自動(dòng)提示檢測(cè)過(guò)程，計(jì)算并打印檢測(cè)結(jié)果，可與計(jì)算機(jī)連用進(jìn)行數(shù)據(jù)的存儲(chǔ)及網(wǎng)絡(luò)傳輸。 第四，乙酰膽堿酯酶的來(lái)源問(wèn)題一直是困擾農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的一個(gè)重要因素。如果采用進(jìn)口酶源不但價(jià)格較昂貴，而且到貨周期較長(zhǎng)，難以滿足檢測(cè)過(guò)程的需

6、求。本文以胎牛血清為例對(duì)乙酰膽堿酯酶的分離純化進(jìn)行了一定的探索。在對(duì)酶活性進(jìn)行科學(xué)定義的基礎(chǔ)上，分別考察了AchE最適的pH范圍、溫度、底物濃度、反應(yīng)時(shí)間等因素，最終確定出AchE的檢測(cè)方法，為酶的分離純化奠定了基礎(chǔ)。通過(guò)采用硫酸銨逐級(jí)沉淀、葡聚糖凝膠柱層析、DEAE纖維素柱層析三步分離純化過(guò)程，可得到單點(diǎn)純的乙酰膽堿酯酶，表現(xiàn)在凝膠電泳上即由硫酸銨沉淀液的4條譜帶減少至一條譜帶。 第五，將研制出的搗碎提取設(shè)備、固化乙酰膽堿酯酶