王漿主蛋白的抗衰老功能及分子機(jī)理研究.pdf_第1頁(yè)
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1、隨著國(guó)內(nèi)外人口老齡化問(wèn)題的加劇,國(guó)際市場(chǎng)對(duì)抗衰老功能食品的需求越來(lái)越大,蜂王漿(RJ)作為國(guó)際公認(rèn)的傳統(tǒng)抗衰老功能食品,將發(fā)揮更加重要的作用。根據(jù)新近研究報(bào)道,王漿主蛋白(MRJPs)是RJ的關(guān)鍵活性成分,但是否對(duì)哺乳動(dòng)物具有抗衰老作用及作用機(jī)理尚未見報(bào)道。本研究以從新鮮RJ超濾分離的MRJPs凍干粉為研究對(duì)象,以自然衰老大鼠和人體細(xì)胞為模型,進(jìn)行了MRJPs的抗衰老作用及分子機(jī)理系統(tǒng)研究,結(jié)果如下:
  1.MRJPs對(duì)大鼠的抗

2、衰老作用及分子機(jī)理
  電泳結(jié)果顯示MRJPs集中在49-80 kDa,其氨基酸組成與酪蛋白相似,說(shuō)明MRJPs的功能不是體現(xiàn)在氨基酸水平上,而是通過(guò)特殊的形式來(lái)表現(xiàn)其生物活性。衰老大鼠的附睪和睪丸指數(shù)顯著低于青年大鼠,口服MRJPs并不能改變這種臟器的退化,對(duì)其它臟器指數(shù)和體重也未產(chǎn)生明顯影響。蘇木精-伊紅染色結(jié)果表明,MRJPs可以明顯改善衰老引起的大鼠肝臟及腎臟等重要器官出現(xiàn)的病理性特征??诜﨧RJPs能顯著提高大鼠血液的C

3、AT活力(P<0.05),降低血液的脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA水平;MRJPs干預(yù)組的GSH含量與GSH-PX活力與青年大鼠表現(xiàn)出類似的調(diào)節(jié)方式,顯示MRJPs具有良好的抗氧化活性。
  mTOR轉(zhuǎn)錄水平與MRJPs干預(yù)劑量呈正相關(guān)。S6激酶(S6K)通過(guò)mTOR途徑被激活,并出現(xiàn)轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)趨勢(shì)。青年大鼠的mTOR基因轉(zhuǎn)錄水平顯著高于自然衰老對(duì)照組,而MRJPs干預(yù)能提高衰老大鼠的mTOR基因轉(zhuǎn)錄水平,類似現(xiàn)象在s6k基因中也有發(fā)現(xiàn)。青

4、年大鼠的Foxo1基因轉(zhuǎn)錄水平顯著高于自然衰老對(duì)照組,而MRJPs干預(yù)能提高衰老大鼠Foxo1基因轉(zhuǎn)錄水平,顯示抗衰老活性。此外,MRJPs能顯著提高大鼠血液中端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶TERT基因的表達(dá),說(shuō)明其抗衰老機(jī)理可能與TERT的轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)有關(guān)。與SOD未出現(xiàn)明顯改變一樣,Sod1基因的轉(zhuǎn)錄水平在干預(yù)后也未出現(xiàn)明顯變化。
  2.MRJPs對(duì)大鼠認(rèn)知功能的改善作用
  動(dòng)物水迷宮實(shí)驗(yàn)表明,逃避潛伏期較對(duì)照和酪蛋白組分別縮短了

5、48.5%(P=0.0045)和49.9%(P=0.0036);穿過(guò)目標(biāo)區(qū)域的次數(shù)較對(duì)照和酪蛋白組分別提高了177.4%和46.1%,說(shuō)明MRJPs能顯著改善老年大鼠的空間認(rèn)知能力。基于超高效液相色譜四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-QTOF/MS)的大鼠尿液指紋圖譜表明,MRJPs干預(yù)衰老大鼠后,其代謝特征出現(xiàn)回歸青年大鼠的趨勢(shì)。鑒定了28個(gè)與衰老相關(guān)的生物標(biāo)記物,其中6個(gè)標(biāo)記物,煙酸單核苷酸(1),丙氨酸丁氨酸硒醚(2),CDP-乙醇胺

6、(3),磺基丙氨酸(4),磷酸烯醇式丙酮酸(5)和黃嘌呤核苷(6)在MRJPs干預(yù)后發(fā)生顯著改變。結(jié)合文獻(xiàn)RJ改善記憶的功能分析,RJ來(lái)源的MRJPs有可能是一種新的提高認(rèn)知功能的補(bǔ)充蛋白質(zhì)。
  3.MRJPs及KHCO3對(duì)大鼠骨密度的改善作用
  補(bǔ)充MRJPs及KHCO3不會(huì)影響大鼠體重。血液肝功能檢測(cè)結(jié)果表明,MRJPs及KHCO3作為膳食補(bǔ)充劑是安全的,且對(duì)肝功能有一定調(diào)節(jié)作用。MRJPs會(huì)導(dǎo)致大鼠骨密度輕微降低,

7、推測(cè)其通過(guò)降低雌激素水平、促進(jìn)鈣流失而引起骨密度的降低。同時(shí)補(bǔ)充KHCO3(100mg/mL)可防止骨密度的降低,并引起雌二醇水平降低,而MRJPs與雌二醇共同作用于成骨細(xì)胞時(shí)存在拮抗作用,說(shuō)明MRJPs與KHCO3對(duì)骨密度的聯(lián)合保護(hù)作用可能是通過(guò)降低MRJPs和雌二醇對(duì)成骨細(xì)胞的拮抗作用實(shí)現(xiàn)的。MRJPs與KHCO3的協(xié)同作用具有一定的抗氧化性。補(bǔ)充MRJPs和KHCO3在一定程度上能降低CTX-Ⅰ,顯著提高Ⅰ型原骨膠原(P1NP)和

8、OPG含量,而補(bǔ)充的KHCO3有類似的效果。MRJPs和雌二醇能上調(diào)clock、cry1和cry2,下調(diào)bmal1,說(shuō)明通過(guò)時(shí)鐘節(jié)律調(diào)控途徑可影響骨密度。
  4.MRJPs對(duì)MRC-5細(xì)胞的抗衰老作用
  當(dāng)MRC-5細(xì)胞處于中年期時(shí),補(bǔ)充終濃度25-200μg/mL的MRJPs對(duì)MRC-5雖有一定的促進(jìn)作用,但不顯著。流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果表明,MRJPs對(duì)處于中年期MRC-5細(xì)胞增殖指數(shù)的影響并不明顯。但當(dāng)MRC-5細(xì)胞進(jìn)入

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