1、高效液相色譜(HPLC-UV)法測定奶粉中 三聚氰胺的含量摘要：本文介紹了三聚氰胺對人體的危害，不法廠家向乳制品中摻入三聚氰胺的原因以及各種檢測奶粉中三聚氰胺含量的方法，包括液相色譜-紫外法，氣相色譜-質譜法，熒光光譜法，電化學方法，毛細管電泳法等。關鍵詞：三聚氰胺；奶粉；液相色譜；熒光光譜；氣相色譜-質譜聯(lián)用；三聚氰胺：三聚氰胺(melamine)化學式為C3H6N6，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機化合物，俗稱密胺、蛋白精。三聚氰胺的危害以

2、及不法廠家摻入三聚氰胺的目的：2008年9月發(fā)生了“毒奶粉”事件，很多生產奶粉的公司非法向奶粉中添加三聚氰胺以提升奶粉中的氮含量。由于三聚氰胺(含氮量66%)與蛋白質(平均含氮量16%)相比含有更高比例的氮元素，所以被一些不法分子利用，添加在食品中以造成食品蛋白質含量較高的假象。由于當時國家使用的蛋白質中氮含量的測定方法是凱氏定氮法通過樣品消解將樣品中所有氮元素轉化為氨，通過H2SO4或HCl標準溶液進行滴定，所以無法區(qū)分蛋白質氮和非蛋

3、白質氮，摻入三聚氰胺可以提升氮含量從而達到提升“蛋白質含量”的目的[2]。然而三聚氰胺對人體是有危害的，尤其奶粉是給小孩子吃的，危害更大。大劑量的三聚氰胺導致當時很多食用奶粉的嬰幼兒出現(xiàn)泌尿系結石。研究表明，三聚氰胺對腎小球、腎小管功能有損害, 且年齡越小、服用三聚氰胺污染奶粉時間越長損害程度越重[3]。2008 年10 月7 日，衛(wèi)生部等5 部門聯(lián)合發(fā)布公告，確定了乳與乳制品中三聚氰胺臨時管理限量值（即嬰幼兒配方乳粉中三聚氰胺的限量值

4、）為1 mg/kg，液態(tài)奶(包括原料乳)、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值為2.5 mg/kg。三聚氰胺含量測定的各種方法：1.高效液相色譜法:1.1.實驗方法：[4]以三氯乙酸-乙腈超聲提取后離心，取上層清液過濾后定容，轉移至混合型陽離子交換固相色譜柱用氨化甲醇洗脫，50℃下氮氣吹干，用流動相定容，渦旋，過微孔濾膜后供HPLC測定，測定條件：C18柱（250mm*4.6mm，5μm），流動相為離子對試劑緩沖溶液-乙腈（90：10）

5、，流速1.0mL/min，柱溫40℃。測量波長240nm。1.2.小結：該法預處理過程略復雜；色譜流動相添加的離子對試劑（己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉等）易與C8 或C18 柱形成化學結合，所以柱平衡時間長，選擇性差；而離子對試劑的使用將縮小各物質間的差異，奶粉中多種物質（如水溶性維生素、核酸等）均可與離子對試劑3.4.小結：該法的最大特點是檢測限低，適用于痕量三聚氰胺分析。檢測限為0.0985μg/kg。線性范圍在0.5~10μg/kg?；?/p>

6、收率在95%到96%，符合測量要求。預處理過程也比較簡單，但是反應時間較長（12小時），且線性范圍不在測量奶粉中三聚氰胺含量的范圍內。但是線性范圍低，可以稀釋后測定，所以仍然符合我們的測量要求。4.高效液相色譜法（改進）：[1]4.1.實驗方法：將15.00 g 樣品置于50ml 具塞刻度試管中，加入22 g/L 乙酸鉛溶液5 ml，加入25 ml 甲醇-水溶液（1+1），漩渦混勻，加水至刻度，漩渦混勻，振搖2 min

7、后，過濾，取上清濾液，經0.45 μm有機相濾膜過濾后進樣。檢測條件：鍵合磺酸基的強陽離子交換C18 色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以50 mmol/L 磷酸鹽緩沖溶液+乙腈（70+30）作為流動相，流量為1.0 ml/min，柱溫為25 ℃，檢測波長為240 nm，進樣量為20 μl。將三聚氰胺標準儲備液（1.00×10^3 mg/L）用甲醇-水溶液（1+1） 逐級稀釋得到濃度為0.20、0.

8、50、2.00、5.00、20.00、50.00 mg/L的標準系列溶液，以峰面積（y）對濃度（x）繪制標準曲線。4.2.小結：該法檢出限為0.05 mg/kg，線性范圍在0.2～50mg/L。改進了國標法，操作較簡單快速，回收率與靈敏度都較高。適合用于分析乳制品中三聚氰胺殘留量。5.電化學方法：[7]5.1.實驗方法：先用三氯乙酸溶解牛奶樣品，通過固相萃取提取其中的三聚氰胺。將玻碳電極在含三聚氰胺的牛奶樣品提取液中進行循環(huán)伏安法掃描，

9、在0.7V 左右會出現(xiàn)一對氧化還原峰。這一對峰的峰電流的大小與三聚氰胺的含量呈正比，據(jù)此可進行三聚氰胺的定量分析。5.2.小結：此峰電流與三聚氰胺含量在15～345mg/kg 的范圍內呈線性關系，該方法檢測三聚氰胺的檢測限為5mg/kg，測定方法的回收率和相對標準偏差分別為97.3%～101.2% 和3.5%～4.5%。檢測限偏高，標準偏差也偏高。該法主要還是三聚氰胺的定性檢測，用于定量有點不大合適。6.毛細管電泳法：[8]6.1.實驗

10、方法：采用高效毛細管電泳法測定，以30mmol/L 磷酸鹽緩沖液(pH5.0)為電泳介質，未涂層石英毛細管(75μm× 78cm，有效長度70cm)為分離通道，紫外檢測波長240nm，分離電壓10kV。6.2.小結：在10.0～50.0μg/mL 范圍內線性關系良好，r=0.9992。平均加標回收率為97.04%，平均RSD 為1.24%(n=3)。該法快速簡便，線性范圍略偏高，標準偏差較小，可以用于三聚氰胺含量的定量分析。7