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![60~70%最大攝氧量有氧運動后大鼠心房肌差異蛋白質(zhì)的篩選及其表達(dá)研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/8/23/7c42e732-6b2f-4e92-98a5-861281f5c93e/7c42e732-6b2f-4e92-98a5-861281f5c93e1.gif)
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文檔簡介
1、目的:通過對中小強度有氧運動后大鼠心房肌蛋白質(zhì)組表達(dá)特征的研究,篩選出對運動產(chǎn)生反應(yīng)的應(yīng)激蛋白質(zhì),并進(jìn)一步探討應(yīng)激蛋白質(zhì)的基因表達(dá)水平,為運動心臟蛋白質(zhì)組學(xué)的后繼研究提供實驗基礎(chǔ)。
方法:20只SD雄性大鼠隨機分為運動組和對照組(n=10),運動組大鼠采用跑臺訓(xùn)練建立中小強度(60~70%最大攝氧量)有氧運動動物運動模型。8周后,提取心房肌組織全蛋白進(jìn)行雙向凝膠電泳(2—DE),使用ImageMaster2D Platin
2、um圖像分析軟件對2—DE圖譜進(jìn)行分析,篩選出差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點,并應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI—TOF—MS)獲得其中表達(dá)量變化≥5倍的蛋白質(zhì)點的肽質(zhì)量指紋譜,通過搜索數(shù)據(jù)庫進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定,并采用實時定量逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT—PCR)技術(shù)檢測6個目標(biāo)蛋白質(zhì)的mRNA表達(dá)水平。
結(jié)果:①8周中小強度有氧運動后,大鼠的心臟重量增加了1.7%,心重指數(shù)增加了32%;②經(jīng)圖像分析,運動組和對照組心房肌
3、電泳圖譜中平均檢測到蛋白質(zhì)點(380±62)個和(411±59)個,獲得差異大于2倍的蛋白質(zhì)點68個。其中,獲得具有5倍以上差異表達(dá)量的蛋白質(zhì)點14個,7個表現(xiàn)為上調(diào),7個表現(xiàn)為下調(diào)。對差異表達(dá)的14個蛋白質(zhì)點進(jìn)行質(zhì)譜分析,成功鑒定出11種蛋白質(zhì),如心臟脂肪酸結(jié)合蛋白、熱休克蛋白60、線粒體ATP合成酶亞基d、ATP合酶偶合因子6、蛋白組氨酸磷酸酶1、原肌球蛋白α4鏈等;③RT—PCR結(jié)果顯示:運動組大鼠心房肌中蛋白組氨酸磷酸酶1、熱休
4、克蛋白60、ATP合酶偶合因子6、線粒體ATP合成酶亞基d、原肌球蛋白α4鏈、心臟脂肪酸結(jié)合蛋白的基因表達(dá)水平均上調(diào),且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。5個目標(biāo)蛋白質(zhì)中,只有熱休克蛋白60和蛋白組氨酸磷酸酶1的蛋白表達(dá)水平和基因表達(dá)水平一致,其他的均不一致。
結(jié)論:①長時間中小強度有氧運動后,大鼠心房肌蛋白質(zhì)發(fā)生了適應(yīng)性變化。②質(zhì)譜確證的心臟脂肪酸結(jié)合蛋白、線粒體ATP合成酶亞基d和ATP合酶偶合因子6等目標(biāo)蛋白與提高心肌
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