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文檔簡介
1、目的:
本研究探討4周有氧運動對大鼠心房肌蛋白質(zhì)組差異表達的影響,篩選出心房肌中與有氧運動適應(yīng)密切相關(guān)的目標(biāo)蛋白質(zhì)點,并對部分目標(biāo)蛋白質(zhì)點的mRNA表達水平進行研究,為深入研究長期規(guī)律的有氧運動促進心臟健康;為全民健身運動及慢性心血管疾病的運動康復(fù)研究提供新的思路及理論依據(jù)與實驗基礎(chǔ)。
方法:
20只SD雄性大鼠按體重和運動能力隨機配對分為運動組和對照組(n=10)。采用跑臺運動的方式,適應(yīng)性訓(xùn)
2、練后,復(fù)制24m·min-1×40min運動強度負荷持續(xù)訓(xùn)練4周的有氧運動實驗動物模型(負荷強度相當(dāng)于60~70%VO2max)。最后一次訓(xùn)練后6小時,運動與對照組的大鼠同時麻醉處死,提取心房肌組織的全蛋白,采用雙向凝膠電泳技術(shù)對蛋白質(zhì)進行分離,運用BioPDquest圖像分析軟件對2-DE圖譜進行分析,并應(yīng)用串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀對其中表達量變化上調(diào)5倍以上及下調(diào)至1/5以下的13個目標(biāo)蛋白質(zhì)點進行質(zhì)譜鑒定,用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT
3、-PCR)技術(shù)檢測對7個目標(biāo)蛋白質(zhì)的基因表達水平檢測。
結(jié)果:
①經(jīng)4周有氧運動后,與對照組相比,大鼠的心臟重量的百分率增加了1.7%,心重指數(shù)增加了32%(P<0.05);②在2-DE電泳圖譜上運動組檢測到蛋白質(zhì)點370±35個,安靜對照組檢測到422±7個,運動后差異表達的蛋白質(zhì)點共有53個,未見新增或缺失的蛋白質(zhì)點,其中表達量上調(diào)5倍以上的點有5個,下調(diào)5倍的點8個,對篩選出的13個蛋白質(zhì)點進行質(zhì)譜分析
4、,成功鑒定出11種蛋白質(zhì)和一個分子量為54KDa的未知蛋白,如丙酮酸脫氫酶Elαl、甲基丙二酸半醛脫氫酶[?;鵠、絲裂素活化蛋白激酶3。③RT-PCR檢測結(jié)果:運動組大鼠心房肌中甲基丙二酸半醛脫氫酶、細胞質(zhì)蘋果酸脫氫酶的mRNA相對凈光密度值低于對照組(P<0.05);線粒體二氫硫辛酸脫氫酶、谷胱甘肽合成酶、線粒體烏頭酸水合酶、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶A3的mRNA相對凈光密度值低于對照組(P>0.05);異戊烯輔酶A脫氫酶mRNA相對凈光密
5、度值高于對照組(P>0.05)。
結(jié)論:
(1)經(jīng)過4周有氧運動后,大鼠心房肌蛋白質(zhì)組差異表達顯著,包括蛋白質(zhì)點數(shù)目的差異變化和蛋白質(zhì)點表達強度的大幅度上調(diào)或下調(diào)。(2)質(zhì)譜鑒定出來的丙酮酸脫氫酶Elαl、線粒體烏頭酸水合酶等目標(biāo)蛋白的上調(diào)與提高心肌細胞能量代謝水平有關(guān)。絲裂素活性蛋白激酶3的上調(diào)與促使心肌細胞肥大增殖有關(guān),表明中等強度有氧運動也能像大強度運動一樣,導(dǎo)致運動心臟重塑,改善心臟的收縮泵血功能。(
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