1、絲狀真菌因其擁有強大的蛋白分泌能力而被廣泛應用于工業(yè)酶的生產(chǎn)。隨著基因工程與分子生物學的發(fā)展，利用絲狀真菌生產(chǎn)重組蛋白越來越受到人們的關注。由于任何單一菌種都不能滿足不同工業(yè)蛋白質(zhì)生產(chǎn)的需求，因此更多的絲狀真菌加入到蛋白質(zhì)表達宿主菌的候選名單。粗糙脈孢菌具有良好的蛋白表達和分泌能力，并且擁有良好的遺傳學研究基礎和基因組數(shù)據(jù)，是利用分子生物學改造構建纖維素酶生產(chǎn)菌株和生產(chǎn)其他目的蛋白的理想菌種，所以利用粗糙脈孢菌構建蛋白生產(chǎn)系統(tǒng)，在基因工

2、程操作上具有明顯優(yōu)勢。目前已經(jīng)有開發(fā)粗糙脈孢菌作為蛋白質(zhì)表達體系的研究，包括表達生產(chǎn)植物蛋白、疫苗抗體和內(nèi)切葡聚糖酶等，這些研究表明粗糙脈孢菌是發(fā)展新型異源蛋白表達的良好體系，具有較大的潛力。
　　本研究利用粗糙脈孢菌良好的基因組研究資源和全基因組基因敲除突變體庫，從載體和宿主改造兩方面開展研究，初步建立了纖維二糖誘導的粗糙脈孢菌蛋白質(zhì)表達系統(tǒng)。木研究以3個β-葡萄糖苷酶缺失的三突變株(3ΔβG)為出發(fā)菌株，通過真菌雜交技術進一步

3、缺失了兩個纖維二糖水解酶CBH1和CBH2，構建了組氨酸缺陷型六突變?nèi)笔Ь闘Q-1（Δ3βG∷Δ2cbh∷Δhis3），該菌株可以利用纖維二糖作為誘導物誘導纖維素酶啟動子表達，同時又消除了纖維二糖水解酶蛋白的背景條帶，可以作為蛋白表達的宿主菌株。同時，構建了分別含有粗糙脈孢菌自身強肩動子（Pcbh-1、Pcbh-2和Ptef-1）的3個新的表達載體，該載體帶有融合標簽蛋白tev-6xhis-gfp，能夠高效方便的篩選陽性轉(zhuǎn)化子，也有利