1、目的：本實驗以宮頸癌Hela細(xì)胞為研究對象，分析天花粉蛋白(TCS)處理前后Hela細(xì)胞中miRNA表達譜的變化情況。探索TCS處理Hela細(xì)胞后miR-4455表達上調(diào)的機制以及對細(xì)胞遷移和侵襲的影響。
　　方法：⑴TCS處理人宮頸癌Hela細(xì)胞后，基因芯片技術(shù)分析藥物處理前后Hela細(xì)胞中miRNA表達譜的變化情況。⑵實時定量PCR技術(shù)驗證TCS對miR-4455表達的影響是否與芯片結(jié)果一致。⑶克隆miR-4455啟動子并用報

2、告基因技術(shù)驗證其活性。⑷硫化測序PCR技術(shù)驗證TCS處理Hela細(xì)胞后對miR-4455甲基化狀態(tài)的影響。⑸Transwell實驗檢測高表達miR-4455對宮頸癌Hela細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。⑹Western blot檢測高表達miR-4455對上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)標(biāo)志蛋白E-cad的影響。
　　結(jié)果：①利用miRNA芯片技術(shù)成功篩選出TCS處理前后差異表達的miRNAs，其中有10個miRNA表達下調(diào)，15個表達上調(diào)

3、。②實時定量PCR驗證了miR-4455表達上調(diào)與芯片結(jié)果相一致。③報告基因分析發(fā)現(xiàn)miR-4455上游1896bp片段中含有一個較弱的啟動子。④硫化測序PCR分析發(fā)現(xiàn)TCS處理宮頸癌Hela細(xì)胞后對miR-4455啟動子有去甲基化作用。⑤Transwell實驗結(jié)果提示高表達miR-4455能在一定程度抑制宮頸癌Hela細(xì)胞遷移和侵襲能力。⑥Western blot結(jié)果表明高表達miR-4455增加了EMT相關(guān)上皮標(biāo)志蛋白E-cad的表