1、復旦大學碩士學位論文天花粉蛋應用于喉癌細胞化療及機制的研究復旦大學碩士學位論文天花粉蛋白應用于喉癌化療及機制的研究StudyontheChemotherapyofLaryngealSquamousCarcinomabyTrichsanthin研究方向：耳鼻咽喉頭頸外科碩士研究生：張鐸導師：陶磊副教授導師組成員：路麗明副研究員程磊副主任醫(yī)師張明副主任醫(yī)師復旦大學附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院二。一三年四月復旦大學碩士學位論文天花粉蛋應用于喉癌細胞化療

2、及機制的研究天花粉蛋白應用于喉癌細胞化療及機制的研究摘要目的：研究天花粉蛋白(trichosanthin，TCS)單獨或聯(lián)合順鉑用于對喉癌(HEp。2細胞株和AMCFIN一8細胞株)增殖抑制，以及研究TCS激活的JNK／MAPK信號通路與其發(fā)揮藥理作用之間的關系。方法：設立不同的實驗組，包括不同濃度TCS組(1、5、9、1399／m1)，低濃度順鉑組(3gg／m1)、高濃度順鉑組(10gg／m1)、及TCS和順鉑聯(lián)合作用組(5pg／ml

3、TCS和3gg／ml順鉑)，陰性對照組；連續(xù)5天使用CCK8法(cellcountingkit一8，CCK8)和乳酸脫氫酶法檢測不同實驗組對喉癌細胞的抑制作用和細胞毒性；流式細胞儀和Hochest33258染色觀察細胞凋亡和細胞周期：Westernblot檢測JNK／MAPK，磷酸化JNK／MAPK、核因子KB(nuclearfactorKB，NFvd3)、p38、磷酸化p38、I—vB及磷酸化I1(B的變化。結果：TCS通過誘導細胞凋

4、亡和細胞周期停滯的方式來抑制喉癌細胞增殖，TCS通過時間和濃度依賴的方式激活JNK／MAPK信號通路，從蛋白水平上阻斷JNK／MAPK信號通路，TCS對喉癌細胞的增殖抑制作用和誘導細胞凋亡的作用減弱，與TCS和低劑量順鉑單獨作用相比，TCS和順鉑聯(lián)合作用可明顯抑制喉癌細胞的生長(PO05)，而毒性低于高濃度順鉑組(P001)；Westernblot顯示順鉑增強NF—KB轉錄因子活性，抑制JNK信號通路，TCS組主要激活JNK／MAPK信

5、號通路而抑制NFKB，TCS和順鉑聯(lián)合作用后磷酸化JNK保持高水平抑制NF—KB活性。結論：TCS通過激活JNK／MAPK信號通路，發(fā)揮其抑制喉癌細胞增殖作用，同時抑制NF—KB轉錄因子活性，增強順鉑誘導喉癌細胞凋亡比例，從而降低其對細胞的毒性并增強其抗腫瘤療效，為中藥天花粉蛋白聯(lián)合順鉑應用于喉癌臨床治療奠定了實驗基礎。關鍵詞：天花粉蛋白：喉癌細胞株；凋亡；JNK／MAPK；順鉑；NF一1(B注：本課題為國家自然科學青年基金(30801