1、創(chuàng)傷性腦損傷（TBI）是導致死亡和殘疾的主要原因之一。腦損傷后常伴有明顯的炎癥反應，一般來說，這種炎癥反應是有利的，然而過度的炎癥反應可能會對機體帶來損害。中樞神經系統(tǒng)(CNS)固有的小膠質細胞和由血液浸潤而來的巨噬細胞是這種炎癥反應的主要參與者。小膠質細胞類型特異的RNA測序結果表明，Bcl2a的mRNA特異地在小膠質細胞轉錄。本研究以此為基礎。B細胞淋巴瘤-2（Bcl-2）蛋白是重要的細胞死亡的調節(jié)分子，其主要功能是控制內源性凋亡途

2、徑中從線粒體釋放細胞色素c。Bcl2蛋白家族包括促進和抑制凋亡蛋白，它們通過多種方式互相作用。由于其在細胞凋亡過程中的重要作用，有許多抗凋亡Bcl-2蛋白被確定為重要的細胞癌基因和抗癌治療的有吸引力的目標。本課題對B細胞淋巴瘤相關蛋白2a（Bcl2a），Bcl2蛋白家族中一個抑制細胞凋亡的蛋白分子進行了調查研究，旨在回答如下問題：在中樞神經系統(tǒng)，Bcl2a表達于什么細胞類型？是否在小膠質細胞表達？機械性腦損傷之后以及在不同刺激條件下的體

3、外培養(yǎng)小膠質細胞中，Bcl2a的表達是如何調節(jié)的？
　　目的：建立小鼠機械性腦損傷模型，研究Bcl2a在中樞神經系統(tǒng)受損后表達變化情況，探討它在中樞神經系統(tǒng)損傷與修復過程中可能的功能與意義。利用LPS或機械劃傷刺激體外培養(yǎng)的原代小膠質細胞，檢測Bcl2a的表達情況，探討B(tài)cl2a在小膠質細胞中表達的變化和調節(jié),以期為探索調節(jié)小膠質細胞/巨噬細胞的活化及反應特征提供新的思路。
　　方法：采用手術刀片劃傷小鼠端腦大腦皮層的方法建

4、立小鼠機械性腦損傷模型，首先用RT-PCR、Western blot技術檢測Bcl2a在小鼠腦損傷之后不同時間點的表達情況；接著利用免疫組化（IHC）及免疫熒光多重標記技術（IF）觀察Bcl2a在大腦中的表達變化及細胞定位情況。運用IHC/IF雙標記Bcl2a與小膠質細胞marker CD11b，神經元marker NeuN,以檢測Bcl2a在腦損傷之后細胞定位是否發(fā)生變化；體外培養(yǎng)原代小膠質細胞，用不同濃度的LPS及機械劃傷刺激原代小

5、膠質細胞，然后用免疫熒光雙標記去檢測Bcl2a的表達變化情況。
　　結果：免疫組化結果顯示，在正常腦內，Bcl2a蛋白主要在神經元上弱表達，在靜息的小膠質細胞中表達較少。在機械性腦損傷后，RT-PCR結果顯示，在損傷腦區(qū)Bcl2a的mRNA轉錄水平顯著增加，損傷后3d其mRNA表達明顯高于1d而達頂峰。Western blot結果顯示，在損傷后Bcl2a蛋白翻譯水平顯著增加，于損傷后3-7d達頂峰，之后Bcl2a的蛋白表達恢復正常

6、。免疫熒光多重標記及激光共聚焦掃描結果揭示，在損傷腦區(qū)Bcl2a蛋白表達上調的主要細胞是激活的小膠質細胞/巨噬細胞。不同濃度LPS刺激原代培養(yǎng)小膠質細胞后，Bcl2a的蛋白表達量增加，而且呈濃度依賴性上調。同一濃度的LPS刺激原代培養(yǎng)小膠質細胞，Bcl2a的蛋白表達呈時間依賴性上調。單純的機械性劃痕也引起B(yǎng)cl2a蛋白在劃傷的小膠質細胞的上調。
　　結論：⑴Bcl2a在正常神經系統(tǒng)主要在神經元上弱表達，在靜息的小膠質細胞中表達較少