1、目的：以人肺腺癌細胞系A(chǔ)549細胞為對象研究胰島素作用下肺泡上皮細胞鈉離子通道α亞基(ENaC-α)表達的變化及其可能機制，并觀察胰島素作用下對A549細胞缺氧誘導的凋亡的影響。進一步通過脂多糖誘導的急性肺損傷模型研究胰島素作用下實驗動物血清炎癥介質(zhì)的變化、對肺干濕重比的影響，及對肺泡上皮細胞鈉離子通道表達的調(diào)控及機制，了解胰島素對炎癥、肺水腫清除等方面的影響。
　　 方法：細胞實驗：以A549細胞為對象，用含30U/L的胰島素

2、培養(yǎng)基培養(yǎng)30 min和60 min，分別用蛋白免疫印跡法(Western blotting)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)法測定ENaC-α及血清和糖皮質(zhì)激素誘導的蛋白激酶1(SGK-1)的蛋白及mRNA表達，并使用白屈菜紅堿阻斷蛋白激酶C(PKC)抑制SGK-1后再次測定ENaC-α蛋白表達。用原位末端缺刻標記法(TUNEL)測定經(jīng)胰島素處理后的A549細胞在缺氧條件下誘導凋亡，比較兩組凋亡率變化。動物實驗：72只成年健康SD

3、大鼠隨機分為3組，每組24只，經(jīng)腹腔注射麻醉(戊巴比妥鈉50mg/kg)(1)胰島素治療組(T組，24只)：大鼠麻醉后，經(jīng)頸靜脈插管按5mg/kg劑量注射LPS，兩小時后微量泵泵入含0.5U/ml胰島素的生理鹽水溶液1ml/h，術(shù)中監(jiān)測血糖，調(diào)節(jié)泵速使血糖在2.8-3.2mmol/l之間；(2)LPS模型組(L組，24只)：大鼠麻醉后，經(jīng)頸靜脈插管按5mg/kg劑量注射LPS，兩小時后微量泵泵入生理鹽水1ml/h；(3)對照組(C組，2

4、4只)：試驗中單純給予生理鹽水，首次劑量1ml/kg，兩小時后微量泵持續(xù)泵入生理鹽水1ml/h。以首次注射后兩小時為0點，分別于0，30分鐘，1小時，2小時抽取靜脈血后處死，取肺標本。采集血清，測TNF-α、IL-1β水平。取右肺稱濕質(zhì)量后，置70℃恒溫烤箱中，烘烤72 h至其質(zhì)量不再變化后測定肺臟干質(zhì)量，計算肺濕/干重比右肺組織用于測量肺干濕重比，一部分左肺組織福爾馬林固定，HE染色光鏡下觀察炎癥反應情況及上皮細胞形態(tài)學改變，按病理變

5、化評分，比較炎癥及損傷程度。其余肺組織勻漿，用western-blot法檢測肺組織中SGK-1表達的變化。采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-qPCR)法測定ENaC及血清和糖皮質(zhì)激素誘導的蛋白激酶1(SGK-1)的mRNA，了解其轉(zhuǎn)錄水平。
　　 結(jié)果：用胰島素培養(yǎng)30 min即明顯上調(diào)ENaC-α和SGK-1的蛋白和mRNA表達表達，并隨處理時間延長表達量明顯增加(P<0.05)。胰島素還可以抑制缺氧誘導的A549細胞凋亡

6、(10.3％比21.6％，P<0.05)。若以未添加胰島素培養(yǎng)A549細胞蛋白表達量為100％，胰島素作用30min時ENaC-α、SGK-1蛋白表達量為124％、135％，60 min時ENaC-α、SGK-1蛋白表達量為186％、176％。胰島素治療后1小時組織病理學(4.30±1.6，5.10±1.9 P<0.05)、炎癥指標(IL-1β26.27±6.67，31.5±7.78P<0.05；TNF-α243.1±54.65，291

7、.71±63.56 P<0.05；IL-8，451.53±41.19，538.29±45.14P<0.05；PCT570.96±46.88，525.91±32.17P<0.05)、肺濕/干重比(5.33±1.57，6.32±1.35 P<0.05)，有明顯好轉(zhuǎn)，兩者比較有統(tǒng)計學差異。肺損傷模型建立后，ENaC和SGK-1與對照組比較，表達明顯下降，兩者比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，經(jīng)胰島素治療后SGK-1的蛋白表達增高，SGK-1與