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文檔簡(jiǎn)介
1、本文主要從以下幾部分進(jìn)行論述:
第一部分
目的:篩選人肝癌組織及其癌旁正常肝組織差異性表達(dá)mRNA并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。
方法:運(yùn)用Agilent8x60K基因芯片技術(shù)檢測(cè)人肝癌組織及其癌旁正常肝組織的基因表達(dá)譜,利用生物信息學(xué)方法對(duì)差異性表達(dá)基因進(jìn)行GO和Pathway分析,并采用Real-time PCR技術(shù)驗(yàn)證芯片結(jié)果。
結(jié)果:與癌旁正常肝組織相比,肝癌組織差異性表達(dá)基因共有2694個(gè),其中
2、上調(diào)基因有924個(gè),下調(diào)基因有1770個(gè)。GO和Pathway分析提示差異性表達(dá)基因可能參與轉(zhuǎn)錄、氧化還原、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、離子轉(zhuǎn)運(yùn)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞黏附及結(jié)合功能等生物過(guò)程。Real-time PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示GPC3和CTHRC1在肝癌組織中表現(xiàn)為高表達(dá),而GLS2在肝癌組織中表現(xiàn)為低表達(dá),提示Real-time PCR驗(yàn)證結(jié)果與芯片檢測(cè)結(jié)果具有較好一致性。
結(jié)論:基因芯片篩選出的差異性表達(dá)mRNA可能參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫應(yīng)答等諸
3、多關(guān)鍵環(huán)節(jié),可為肝癌相關(guān)特異性標(biāo)記靶向治療提供新的思路。
第二部分
目的:篩選人肝癌組織及其癌旁正常肝組織差異性表達(dá)miRNA并進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)分析。
方法:利用miRNA芯片技術(shù)檢測(cè)人肝癌組織及其癌旁正常肝組織的miRNA表達(dá)譜,篩選出差異性表達(dá)的miRNA,利用生物信息學(xué)軟件對(duì)差異性表達(dá)miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),并用Real-time PCR技術(shù)驗(yàn)證芯片結(jié)果。
結(jié)果:與癌旁正常肝組織相比,肝癌組
4、織差異性表達(dá)miRNA共有33個(gè),其中上調(diào)miRNA有21個(gè),下調(diào)miRNA有12個(gè)。利用生物信息學(xué)軟件對(duì)差異性表達(dá)miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)并與第一部分的mRNA芯片結(jié)果進(jìn)行比對(duì)并取交集后得到了14個(gè)與肝癌密切相關(guān)且值得關(guān)注的miRNA及其靶基因組合。Real-time PCR驗(yàn)證結(jié)果顯示miR-155與miR-96在肝癌組織中表現(xiàn)為高表達(dá),而miR-99a在肝癌組織中表現(xiàn)為低表達(dá),提示Real-time PCR驗(yàn)證結(jié)果與芯片檢測(cè)結(jié)果具
5、有較好一致性。
結(jié)論:miRNA芯片篩選出的差異性表達(dá)miRNA及其靶基因可能參與肝癌侵襲轉(zhuǎn)移等諸多關(guān)鍵環(huán)節(jié),針對(duì)特異性miRNA及其靶基因的治療可為肝癌患者靶向治療開(kāi)辟新的道路。
第三部分
目的:檢測(cè)miR-155、miR-96和miR-99a在肝癌患者血清中表達(dá)水平并進(jìn)行臨床資料分析。
方法:收集30例肝癌患者及健康對(duì)照血清標(biāo)本,利用Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的差異性表達(dá)miR
6、NA(miR-155、miR-96、miR-99a)的表達(dá)水平并進(jìn)行臨床資料分析。
結(jié)果:利用Real-time PCR技術(shù)對(duì)miR-155,miR-96和miR-99a在血清中進(jìn)行表達(dá)水平測(cè)定后,我們發(fā)現(xiàn)miR-155與miR-96的表達(dá)水平在肝癌患者血清中顯著上調(diào),而miR-99a肝癌患者血清中表達(dá)水平顯著下調(diào),以上結(jié)果與組織中相應(yīng)miRNA表達(dá)水平具有高度一致性。以上差異性表達(dá)miRNA與肝癌患者的年齡、性別、腫瘤數(shù)量、
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