1、目的：
　　乳腺癌是全世界女性最常見的惡性腫瘤。我國(guó)女性的乳腺癌發(fā)病率雖然低于全球水平，但發(fā)病率逐年迅猛增長(zhǎng)，位列我國(guó)女性惡性腫瘤死亡原因第二位。
　　PI3K-AKT信號(hào)通路的異常活化在癌癥中被發(fā)現(xiàn)超過20年。PI3K-AKT信號(hào)通路對(duì)于細(xì)胞周期、增殖、生長(zhǎng)、生存、蛋白質(zhì)合成和葡萄糖代謝至關(guān)重要。AKT位于PI3K的下游，p-AKT為AKT的活化形式。當(dāng)AKT活化后，可以磷酸化其下游的許多底物，包括：mTOR、GSK-3、

2、p21WAF1和p27Kip1、FoxO轉(zhuǎn)錄因子、Bcl-2、MDM2等，從而發(fā)揮其促進(jìn)細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)和抗凋亡的作用。通過對(duì)醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索發(fā)現(xiàn)：PI3K-AKT信號(hào)通路在廣泛腫瘤譜中發(fā)生變異，但在臨床病理學(xué)角度（整體水平）對(duì)AKT及p-AKT在乳腺癌組織中的表達(dá)水平存在一定的爭(zhēng)議。大多研究認(rèn)為：AKT、p-AKT在乳腺癌組織中的表達(dá)水平與乳腺癌的臨床分期、組織學(xué)分級(jí)具有相關(guān)性。然而，鮮有關(guān)于AKT、p-AKT與乳腺癌預(yù)后相關(guān)的報(bào)道。此

3、外，馬力教授等[1]通過對(duì)轉(zhuǎn)染了細(xì)胞增殖抑制基因（Mfn2）的乳腺癌細(xì)胞MCF-7研究，發(fā)現(xiàn)Mfn2通過下調(diào)PI3K-AKT信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞凋亡和抑制細(xì)胞增殖。檢索相關(guān)文獻(xiàn)資料未見關(guān)于乳腺癌組織中Mfn2與AKT、p-AKT表達(dá)水平是否相關(guān)的報(bào)道。
　　本研究通過采用免疫組化Max Vision TM一步法，檢測(cè)乳腺正常導(dǎo)管上皮組織及乳腺原發(fā)性浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中AKT、p-AKT的表達(dá)情況。探討AKT、p-AKT的表達(dá)情況與乳腺浸

4、潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，并探究乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中Mfn2與AKT、p-AKT的表達(dá)情況是否存在相關(guān)性，進(jìn)一步揭示Mfn2基因及PI3K-AKT信號(hào)通路在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用，從整體水平初步印證我們的前期工作。
　　方法：
　　1.隨機(jī)連續(xù)收集河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院乳腺中心2008年接受手術(shù)治療的原發(fā)性乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌石蠟包埋組織126例（均有完整隨訪和臨床病理資料）作為研究對(duì)象，以病理證實(shí)的正常乳腺導(dǎo)

5、管上皮組織10例作為對(duì)照組。于我院病理科采用免疫組化Max Vision TM一步法檢測(cè)所有患者病理組織的AKT、p-AKT、Mfn2表達(dá)情況，并按照病理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)復(fù)診原有病理切片。
　　2.將AKT、p-AKT在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的表達(dá)情況與患者年齡、術(shù)后的腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、術(shù)后TNM臨床分期、組織學(xué)分級(jí)、是否存在脈管瘤栓、分子分型、ER、PR、HER2、Ki-67的表達(dá)情況以及DFS、OS等隨訪結(jié)果相結(jié)合探討AKT、p-A

6、KT的表達(dá)情況與乳腺癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。
　　3.觀察乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中Mfn2與 AKT、p-AKT的表達(dá)情況是否存在相關(guān)性。
　　4.應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AKT、p-AKT表達(dá)情況與臨床病理特征結(jié)果采用卡方檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)。AKT、p-AKT表達(dá)情況與預(yù)后關(guān)系應(yīng)用Kaplan-Meier生存曲線進(jìn)行單因素生存分析，COX回歸模型進(jìn)行

7、多因素生存分析。
　　結(jié)果：
　　1.在126例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織標(biāo)本中，p-AKT陰性者共54例（54/126，42.9％），p-AKT陽(yáng)性者共72例（72/126，57.1%）。AKT陰性者共26例（26/126，20.6%），AKT陽(yáng)性者共100例（100/126，79.4%）。在10例正常乳腺導(dǎo)管上皮組織標(biāo)本中，p-AKT陰性者共9例（9/10，90%），p-AKT陽(yáng)性者共1例（1/10，10%）。AKT陰性者共5

8、例（5/10，50%），AKT陽(yáng)性者共5例（5/10，50%）。p-AKT在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于正常乳腺導(dǎo)管上皮組織標(biāo)本（57.1%vs10%），χ2=6.493，P=0.011，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AKT在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率雖高于正常乳腺導(dǎo)管上皮組織標(biāo)本（79.4%vs50%），χ2=3.024，P=0.082，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.根據(jù)術(shù)后病理標(biāo)本的腫瘤大小，將126例患者分為：≤2c

9、m組，共54例（54/126，42.9%）；＞2cm且≤5cm組，共62例（62/126，49.2%）；＞5cm組，共10例（10/126，7.9%）。三組的p-AKT陽(yáng)性率分別為44.4%，62.9%，90.0%。進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，結(jié)果示χ2=8.804， P=0.012，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析，r=0.254，P=0.004。提示原發(fā)腫瘤直徑與p-AKT的表達(dá)呈正相關(guān)。
　　3.根據(jù)術(shù)后石蠟標(biāo)本淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

10、個(gè)數(shù)，將126例患者分為：N0（無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）組，共57例（57/126，45.2%）；N1（淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移1~3枚）組，共26例（26/126，20.6%）；N2（淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移4~9枚）組，共25例（25/126，19.9%）；N3（淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移≥10枚）組，共18例（18/126，14.3%）。四組的p-AKT陽(yáng)性率分別為：42.1%，50.0%，80.0%，83.3%。通過卡方檢驗(yàn)對(duì)四組進(jìn)行比較，χ2=16.180，P=0.001，差異有

11、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析，r=0.338，P＜0.001。提示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目與p-AKT的表達(dá)呈正相關(guān)。
　　4.根據(jù)術(shù)后TNM臨床分期，將126例乳腺癌分為：Ⅰ期患者32例（32/126，25.4%），Ⅱ期患者55例,（55/126，43.7%），Ⅲ期患者39例（39/126，30.9%）。三組的p-AKT陽(yáng)性率分別為40.6%，47.3%，84.6%。應(yīng)用卡方進(jìn)行分析，χ2=17.772，P＜0.001，差異

12、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Spearman相關(guān)性分析結(jié)果示：r=0.347，P＜0.001。提示術(shù)后TNM臨床分期與p-AKT的表達(dá)呈正相關(guān)。
　　5根據(jù)術(shù)后病理診斷中的組織學(xué)分級(jí)，將126例患者分為3組，分別是Ⅰ級(jí)組，共0例（0/126，0%）；Ⅱ級(jí)組，共103例（103/126，81.7%），其中p-AKT陰性者50例（50/103，48.5%），p-AKT陽(yáng)性者53例（53/103，51.5%）；Ⅲ級(jí)組，共23例（23/126，18.3

13、%），其中p-AKT陰性者4例（4/23，17.4%），p-AKT陽(yáng)性者19例（19/23，82.6%）。采用卡方檢驗(yàn)分析兩組間p-AKT的表達(dá)情況，χ2=7.451，P=0.006，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示術(shù)后病理組織學(xué)分級(jí)Ⅲ級(jí)組中p-AKT的陽(yáng)性表達(dá)率較高。
　　6.根據(jù)HER2表達(dá)情況分為：HER2陰性組共92例（92/126，73.0%），其中p-AKT陽(yáng)性者47例（47/92，51.1%）；HER2陽(yáng)性組共34例（34/1

14、26，27.0%），其中p-AKT陽(yáng)性者25例（25/34，73.4%）。應(yīng)用卡方檢驗(yàn)分析p-AKT在兩組中的表達(dá)情況：χ2=5.106，P=0.024，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示在HER2陽(yáng)性組中p-AKT陽(yáng)性率較高。
　　7.根據(jù)患者在隨訪過程中是否發(fā)生過復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移等不良事件的情況將126例乳腺癌患者分為：無(wú)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，共83例（83/126，65.9%）；復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組，共43例（43/126，34.1%）。兩組p-AKT陽(yáng)性率分別為

15、50.6%和69.8%?？ǚ綑z驗(yàn)結(jié)果示兩組間p-AKT的表達(dá)情況差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，χ2=4.248，P=0.039。提示發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組 p-AKT陽(yáng)性率較高。
　　8.按照隨訪終點(diǎn)患者的存活情況將患者分為：存活組，共95例（95/126，75.4%）；死亡組，共31例（31/126，24.6%）。兩組p-AKT陽(yáng)性率分別為49.5%和80.6%。采用卡方檢驗(yàn)分析，結(jié)果示：χ2=9.247， P=0.002，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示

16、在死亡組中p-AKT陽(yáng)性率較高。
　　9.p-AKT表達(dá)情況與患者年齡、組織學(xué)分級(jí)、有無(wú)脈管瘤栓及ER、PR、Ki-67的表達(dá)情況均無(wú)關(guān)（均P>0.05）。
　　10.AKT表達(dá)情況與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、術(shù)后TNM臨床分期、組織學(xué)分級(jí)、有無(wú)脈管瘤栓及ER、PR、HER2、Ki-67的表達(dá)情況、DFS、OS均無(wú)關(guān)（均P>0.05）。
　　11.p-AKT陽(yáng)性組五年OS低于p-AKT陰性組（73.6%，92

17、.6%），χ2=9.461，P=0.002，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。p-AKT陽(yáng)性組五年DFS低于p-AKT陰性組（62.5%，83.3%），χ2=5.002，P=0.025，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這兩項(xiàng)結(jié)果均提示p-AKT的陽(yáng)性表達(dá)與不良預(yù)后有關(guān)。
　　12.將單因素分析得到的對(duì)乳腺癌患者生存期有影響的因素納入COX多因素分析，發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（P=0.033，HR=8.726）、術(shù)后TNM臨床分期（P=0.015，HR=8.348）是

18、影響乳腺癌患者OS的有意義的預(yù)后獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。
　　13.將單因素分析得到的對(duì)乳腺癌患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有影響的因素納入COX多因素分析，發(fā)現(xiàn)只有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（P=0.004，HR=13.324）是影響乳腺癌患者DFS的有意義的預(yù)后獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。
　　14.根據(jù)Mfn2表達(dá)情況將126例患者分為：Mfn2（-）組，共21例（21/126，16.7%）；Mfn2（+）組，共55例（55/126，43.7%）；Mfn2（++）組，共2

19、5例（25/126,19.8%）；Mfn2（+++）組，共25例（25/126,19.8%）。四組中p-AKT的陽(yáng)性率分別為：76.2%，74.5%，48.0%，12.0%。采用卡方檢驗(yàn)分析四組間 p-AKT的表達(dá)情況，χ2=31.569，P＜0.001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。p-AKT表達(dá)情況與Mfn2表達(dá)情況進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：r=-0.455，P＜0.001，說明p-AKT表達(dá)情況與Mfn2表達(dá)情況呈負(fù)線性相關(guān)。Mfn2的表達(dá)降低

20、了p-AKT的表達(dá)水平，提示Mfn2可能是潛在的抑癌基因。
　　結(jié)論:
　　1.p-AKT在乳腺癌組織中的陽(yáng)性率較乳腺正常導(dǎo)管上皮組織升高，提示p-AKT可能與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。
　　2.p-AKT的表達(dá)水平與術(shù)后的腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理TNM臨床分期均呈正相關(guān)，在組織學(xué)分級(jí)Ⅲ組及HER2陽(yáng)性組中p-AKT陽(yáng)性率較高。較大的腫瘤直徑、較多的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HER2陽(yáng)性、較高的TNM臨床分期及組織學(xué)分級(jí)均為提示不

21、良預(yù)后的危險(xiǎn)因素，提示p-AKT的陽(yáng)性表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的腫瘤惡性程度呈正相關(guān)。
　　3.p-AKT的陽(yáng)性表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者DFS及OS呈負(fù)相關(guān)，生存分析結(jié)果顯示p-AKT的陽(yáng)性表達(dá)與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者的預(yù)后不良有關(guān)，但其不能作為影響乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　4.AKT的表達(dá)情況與患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、術(shù)后TNM臨床分期、組織學(xué)分級(jí)、有無(wú)脈管瘤栓及ER、PR、Ki-67、HER2的