1、目的：
　?、贅?gòu)建高H2S載量的穩(wěn)定的載硫化氫微泡(hs-MB);②探索hs-MB對MIRI的作用及可能機制。
　　方法：
　　1.hs-MB的制備及評價
　　由于H2S為小分子氣體，易于溢出微泡，而C3F8為大分子惰性氣體，可增加微泡的穩(wěn)定性，因此，為了制備具有較高穩(wěn)定性和H2S載量的hs-MB，我們探索了H2S和C3F8最佳的混合比例。采用機械震蕩法制備5種載不同比例的H2S和C3F8混合氣體（分別為4/0、

2、3/1、2/2、1/3、0/4）的超聲微泡，顯微鏡觀察微泡的形態(tài)，測量微泡中H2S的含量;在不同時間點(0h、1h、6h、24h、72h)用庫爾特計數(shù)儀測定hs-MB的微泡濃度及粒徑，評估其穩(wěn)定性。根據(jù)微泡濃度、H2S載量和微泡穩(wěn)定性優(yōu)選出最佳的氣體混合比例。
　　2.超聲輻照hs-MB傳輸H2S的實驗研究
　?、?超聲輻照觸發(fā)hs-MB釋放H2S的體外實驗
　　在體外流動腔裝置上，PBS以10ml/min的速度恒速通

3、過，hs-MB以100μl/min泵入，在其下游用超聲空化治療儀發(fā)射的低頻超聲波（發(fā)射頻率1.0MHz，聲壓1.0MPa）進行輻照，液體流出口處采用氣體信號分子和生物自由基檢測儀實時檢測液體中H2S濃度。
　?、?超聲破壞hs-MB定位傳輸H2S的在體實驗:
　　9只SD大鼠隨機分成Control、hs-MB和hs-MB+US組。Control組不予處理;hs-MB組經(jīng)尾靜脈6×109個/(kg·h)泵入hs-MB，持續(xù)30

4、分鐘;hs-MB+US組在泵入hs-MB的同時低頻超聲輻照心前區(qū)。對比超聲檢查觀察hs-MB的成像效果及微泡破壞情況。觀察hs-MB對大鼠血壓心率和呼吸的影響。測量不同器官組織中H2S的濃度。
　　3.超聲破壞hs-MB減輕MIRI的實驗研究
　　72只SD大鼠隨機分成4組(n=18):
　?、?SHAM組:不拉緊左冠脈結(jié)扎線，經(jīng)尾靜脈6ml/（kg·h）泵入生理鹽水。
　?、?MIRI組:拉緊左冠脈結(jié)扎線30m

5、in，經(jīng)尾靜脈6ml/(kg·h)泵入生理鹽水。
　?、?c-MB+US組:拉緊左冠脈結(jié)扎線30min，經(jīng)尾靜脈6×109個/(kg·h)泵入普通超聲微泡（全氟丙烷內(nèi)核，c-MB）。低頻超聲輻照大鼠心前區(qū)破壞微泡。
　　Ⅳ.hs-MB+US組:拉緊左冠脈結(jié)扎線30min，經(jīng)尾靜脈6×109個/(kg·h)泵入hs-MB。超聲輻照方法和條件與c-MB+US組相同。
　　在缺血心肌再灌注前5分鐘開始給予干預(yù)治療，持續(xù)30分

6、鐘。再灌注4小時后，每組取6只大鼠分別行H&E染色和TUNEL染色，取另外6只大鼠測量心肌組織MDA和SOD的濃度。再灌注24小時，行超聲心動圖檢查評估大鼠心功能后處死大鼠取出心臟行TTC/伊文思藍雙染色檢測心肌缺血及梗死面積。
　　4.統(tǒng)計方法
　　運用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學分析，所有數(shù)值均以均數(shù)±標準差（Mean±SD）表示。多組間比較采用單因素方差分析，Bonferroni進行組間多重比較。hs-MB穩(wěn)定性的數(shù)

7、據(jù)采用重復測量數(shù)據(jù)的方差分析進行比較。P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1.H2S/C3Fs為2/2制備的hs-MB具有較高的穩(wěn)定性和H2S載量。H2S/C3F8為2/2制備的hs-MB穩(wěn)定性良好，H2S載量最高，微泡濃度為(1.01±0.19)×109/mL，粒徑為2.26±0.17μm，分布于0-9μm。
　　2.超聲輻照觸發(fā)hs-MB釋放H2S。體外實驗結(jié)果顯示:在輸注hs-MB前，液體中H2S

8、濃度穩(wěn)定維持在0μM水平;加入hs-MB后，H2S濃度稍有增加;若同時輸注hs-MB和低頻超聲輻照，可觀察到H2S濃度顯著增加并維持在3.5-4.5μM，停止微泡輸注和低頻超聲輻照后，H2S濃度迅速降至基線水平。輸注hs-MB和低頻超聲組液體中H2S濃度最大峰值顯著高于僅輸注hs-MB組(P＜0.05)。
　　3.超聲破壞hs-MB促進H2S的定位傳輸。超聲破壞hs-MB定位傳輸H2S的在體實驗結(jié)果顯示:hs-MB具有良好的超聲顯

9、影能力，經(jīng)靜脈注射后可到達心肌組織并可被低頻超聲破壞。hs-MB+US處理后，大鼠心肌組織和肺臟組織中H2S含量較對照組升高（均P＜0.05），而腎臟和肝臟組織中H2S含量無明顯變化(均P＞0.05)。
　　4.hs-MB+US減小心肌梗死面積。與SHAM組相比，MIRI組IS/AAR顯著擴大(P＜0.01)。MIRI和c-MB+US組IS/AAR無顯著差異(P＞0.05)。hs-MB+US組IS/AAR明顯小于c-MB+US組(

10、P＜0.05)。心肌組織H&E染色示hs-MB+US組心肌纖維呈波浪狀排列，肌纖維斷裂程度、間隙水腫和炎癥細胞浸潤程度較c-MB+US組減輕。
　　5.hs-MB+US改善大鼠MIRI后心功能。與SHAM組相比，MIRI組EDd和ESd顯著增加(P＜0.05)，LVFS和LVEF顯著降低(P＜0.01)。MIRI和c-MB+US組ESd、EDd、LVFS和LVEF無差異（所有P＞0.05）。與c-MB+US組相比，hs-MB+US

11、組ESd減小(P＜0.05)，LVFS(P＜0.01)和LVEF(P＜0.01)明顯改善，但EDd無顯著差異(P＞0.05)。
　　6.hs-MB+US減輕MIRI后心肌細胞凋亡。與SHAM組相比，MIRI組凋亡細胞明顯增加(P＜0.01)。MIRI和c-MB+US組心肌細胞凋亡數(shù)目無差異(P＞0.05)。hs-MB+US組凋亡細胞數(shù)目明顯少于c-MB+US組(P＜0.01)。
　　7.hs-MB+US減輕MIRI后氧化應(yīng)激

12、。與SHAM組相比，MIRI組心肌組織中MDA含量增加(P＜0.01)，而SOD含量減低(P＜0.01)。MIRI和c-MB+US組心肌組織中MDA和SOD含量無差異(P＞0.05)。hs-MB+US組心肌組織中MDA含量較c-MB+US組減少(P＜0.05)，而SOD含量增加(P＜0.01)。
　　8.hs-MB+US對大鼠血流動力學和呼吸的無影響。
　　結(jié)論：
　　H2S/C3F8為2/2制備的hs-MB具有較高的