1、在不同配型的單倍體AS7和AS21中，利用LHF-PCR(Long homology flanking-PCR)將醛糖還原酶基因gre3缺失，并引入棲瘤胃真菌Piromyces sp. E2的木糖異構(gòu)酶基因（xylA）和樹(shù)干畢赤酵母（Pichia stipits）的木酮糖激酶(xks1)，雜交融合成雙倍體，探究其利用木糖生長(zhǎng)發(fā)酵、乙醇和木糖醇生成情況。
　　以載體pGAPZαA為骨架，切去GAP啟動(dòng)子、α-信號(hào)肽基因以及AOX終止

2、子、TEF1啟動(dòng)子；將gre3的啟動(dòng)子和終止子引入載體，構(gòu)建出 gre3基因敲除骨架載體pGREZ。以pGREZ載體為骨架，將 xks1克隆入載體 pGREZ，構(gòu)建出單基因置換型表達(dá)載體pGREZ-xks1，再引入xylA，構(gòu)建出雙基因共表達(dá)pGREZ-xylA-xks1。利用電轉(zhuǎn)化法將載體pGREZ-xylA-xks1轉(zhuǎn)入單倍體菌株AS7菌株和AS21菌株，雜交融合成二倍體，獲得gre3缺失、表達(dá)xylA、xks1的單倍體和二倍體。<

3、br>　　缺失gre3基因的單倍體AS7-KA、AS21-KA和二倍體AS7-KA/AS21-KA以及原始菌AS2.489等利用木糖生長(zhǎng)、發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，結(jié)果①重組菌能在木糖為唯一碳源生長(zhǎng)，原始菌株AS2.489基本不長(zhǎng)，重組菌木糖利用速率較快②相比原始菌AS2.489，單倍體AS7-KA、AS21-KA和二倍體 AS7-KA/AS21-KA利用木糖效率更高，木糖轉(zhuǎn)化率也提高，副產(chǎn)物木糖醇產(chǎn)率降低，有少量乙醇生成。
　　利用甲基磺酸乙酯