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文檔簡介
1、核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)是細胞內(nèi)的重要成分,研究表明核糖核酸及其酶解物對免疫系統(tǒng)正常功能、腸道生長發(fā)育、肝組織功能及脂代謝都有重要影響。我國可提供的核酸資源較單一,工業(yè)上主要以廢啤酒酵母作為原料提取RNA,但獲取原料困難,提取率較低,不能滿足市場需要。豆渣中的核酸以核蛋白的形式存在,其含量也不亞于酵母核酸,且豆渣價格低廉,來源豐富,是天然優(yōu)質(zhì)的核酸資源。但目前尚未見有關(guān)豆渣RNA提取及功能的相關(guān)研究。故本論文
2、以豆渣為原料,對RNA的提取、純化及酶解工藝進行了優(yōu)化,進—步以不同劑量豆渣RNA及酶解物為對象,研究二者對小鼠的細胞免疫、體液免疫及非特異性免疫功能的影響,比較二者免疫調(diào)節(jié)作用的差異,具體結(jié)果如下:
(1)通過單因素試驗和響應面分析試驗對豆渣RNA提取工藝進行優(yōu)化,結(jié)果表明:提取溫度為92℃,提取時間為70min,液料比為10∶1,提取液pH5.4為最適提取條件,在此條件下,RNA提取率為0.215%。
(
3、2)比較了無水乙-NaCl,異丙醇-NaCl和LiCl3種不同RNA沉淀劑的純化效果,結(jié)果表明異丙醇-NaCl沉淀劑的純化效果最好,最終RNA得率為0.48%且OD260/OD280為1.83。
(3)以酶解物的核苷酸含量和轉(zhuǎn)化率為檢測指標,通過單因素試驗和正交試驗對牛胰RNA酶酶解豆渣RNA的工藝進行優(yōu)化,得到最佳酶解條件為:酶濃度10%,溫度65℃,pH值4.5,時間1h,底物濃度為2%,在此條件下得到的核苷酸含量為2
4、.2mg/mL,轉(zhuǎn)化率達到62.52%。
(4)研究了豆渣RNA和酶解物對小鼠的細胞免疫、體液免疫及非特異性免疫功能的影響,并比較了兩者的差異。結(jié)果表明,與對照組相比,RNA組和酶解物組均顯著增加脾臟指數(shù),其中酶解物高劑量組脾臟指數(shù)極顯著高于其他各劑量組;同時RNA組和酶解物組的胸腺指數(shù)也有所增加,但與對照組相比,無顯著性差異(P>0.05)。在細胞免疫方面,與對照組相比,RNA組和酶解物組均能顯著提高小鼠脾淋巴細胞增殖能
5、力。其中,酶解物高劑量組與對照組相比,差異極顯著(P<0.01),與RNA組相比,差異顯著(P<0.05);在遲發(fā)性變態(tài)反應試驗中,RNA和酶解物各劑量組DT反應與對照組比較未見顯著性差異P>0.05)。在體液免疫方面,與對照組相比,RNA和酶解物各劑量組均能提高小鼠抗體生成細胞數(shù)。其中,RNA組與對照組相比無顯著性差異,酶解物組與對照組相比差異顯著(P<0.05),且酶解物高劑量組與對照組相比差異極顯著(P<0.01);在血清溶血試驗
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